BRODO DI SOIA TRIPTICASEINA: FONDOTINTA, PREPARAZIONE E USI - BIOLOGIA - 2025

Il brodo di soia triptone è un terreno di coltura liquido, altamente nutriente, non selettivo. Grazie alla sua grande versatilità, è uno dei terreni di coltura liquidi più utilizzati nel laboratorio di microbiologia.

È anche conosciuto con il nome di brodo di soia triptico o caseina-soia digerita, la cui abbreviazione è TSB per il suo acronimo in inglese Tryptic Soy Broth o CST per il suo acronimo in spagnolo. I suoi usi sono molto vari grazie alla sua composizione. È composto da triptein, peptone di soia, cloruro di sodio, fosfato dipotassico e glucosio.

Brodo di soia tripticaseina seminato con un ceppo di Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 in cui si osserva la produzione di pigmento. Fonte: foto scattata dall'autore MSc. Marielsa Gil.

È in grado di riprodurre batteri patogeni clinicamente importanti, compresi quelli nutrizionalmente esigenti e batteri anaerobici. Alcuni funghi opportunistici e contaminanti possono anche svilupparsi in questo ambiente.

Per il suo elevato potere nutritivo, ha un'elevata sensibilità nel rilevare la contaminazione microbica, per questo motivo è stato scelto dall'USDA Animal and Plant Health Inspection Service per l'analisi microbiologica dei vaccini.

Allo stesso modo, il brodo di soia tripticaseina soddisfa i requisiti delle diverse farmacopee (European EP, Japanese JP e North American USP) per lo studio microbiologico di prodotti a livello industriale, come cosmetici e alimenti.

D'altra parte, vale la pena ricordare che nonostante la sua grande utilità, questo mezzo è relativamente economico, rendendolo accessibile per la maggior parte dei laboratori di microbiologia. È anche molto facile da preparare.

Base

Triptein, peptone e glucosio forniscono proprietà nutritive essenziali per renderlo un mezzo ideale per una rapida crescita microbica.

In circa 6-8 ore di incubazione, la crescita può già essere vista nella maggior parte dei microrganismi. Tuttavia, ci sono varietà a crescita lenta che possono richiedere giorni per crescere.

Il cloruro di sodio e il fosfato dipotassico agiscono rispettivamente come equilibrio osmotico e regolatore del pH. La presenza di crescita è evidenziata dalla comparsa di torbidità nel mezzo; se non c'è crescita il mezzo rimane traslucido.

Per il suo colore chiaro è possibile osservare la produzione di pigmenti, come quello mostrato nell'immagine all'inizio dell'articolo, che corrisponde al pigmento prodotto da Pseudomonas aeruginosa.

Preparazione

-Triptysein brodo di soia

Per preparare il brodo di soia triptico, pesare su una bilancia digitale 30 g del terreno commerciale disidratato. Quindi viene sciolto in un litro di acqua distillata contenuta in un pallone.

Si lascia riposare per 5 minuti e poi si porta su una fonte di calore per sciogliere il terreno. Dovrebbe essere mescolato frequentemente mentre bolle per 1 minuto.

Una volta sciolto, viene distribuito in tubi di dimensioni adeguate secondo necessità. Possono essere utilizzati tubi con tappi in cotone o con tappi in bachelite. Successivamente, le provette vengono sterilizzate con il terreno in autoclave a 121 ° C per 15 minuti.

Il pH del mezzo deve rimanere a 7,3 ± 0,2

Va notato che il colore del terreno di coltura disidratato è beige chiaro e deve essere conservato tra 10 e 35 ° C, in un luogo asciutto. Mentre il brodo preparato è di colore ambra chiaro e deve essere conservato in frigorifero (2-8 ° C).

-Varianti di brodo di soia tripticaseina

Il brodo di soia tripticaseina modificato può essere preparato aggiungendo sali biliari e novobiocina per renderlo selettivo per l'isolamento di E. coli. Un'altra opzione per lo stesso scopo è preparare il brodo di soia tripticasi integrato con vancomicina, cefixima e tellurite (2,5 µg / ml).

D'altra parte, più glucosio (0,25%) può essere aggiunto al brodo di soia triptico quando l'obiettivo è stimolare la formazione di biofilm.

Uso

È abbastanza nutriente da consentire la crescita di batteri esigenti o esigenti come Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp e Brucella sp, senza la necessità di integrare con sangue o siero.

Allo stesso modo, alcuni funghi possono svilupparsi in questo brodo, come Candida albicans Complex, Aspergillus sp e Histoplasma capsulatum.

Inoltre, questo terreno in condizioni anaerobiche è ideale per il recupero di batteri appartenenti al genere Clostridium, nonché batteri anaerobici non sporulati di importanza clinica.

Se viene aggiunto cloruro di sodio al 6,5%, può essere utilizzato per la crescita di Enterococcus e altri streptococchi di gruppo D.

A livello di ricerca, è stato molto utile in vari protocolli, soprattutto nello studio del biofilm o batteri che formano il biofilm. Viene anche utilizzato per preparare la sospensione batterica di Mac Farland allo 0,5% necessaria per eseguire l'antibiogramma con il metodo Kirby e Bauer.

In questo caso, vengono prelevate da 3 a 5 colonie di aspetto simile ed emulsionate in 4-5 ml di brodo di soia tripticasiina. Viene quindi incubato per 2-6 ore a 35-37 ° C e successivamente regolato alla concentrazione desiderata utilizzando soluzione salina sterile. I brodi di soia con tripticasi non devono essere utilizzati dalle 18 alle 24 ore di incubazione.

Sown

Il campione può essere seminato direttamente oppure si possono subcolture colonie pure prelevate da terreni selettivi. L'inoculo deve essere piccolo in modo da non appannare il terreno prima dell'incubazione.

Normalmente viene incubato a 37 ° C in aerobiosi per 24 ore, ma queste condizioni possono variare a seconda del microrganismo ricercato. Se necessario, può anche essere incubato in condizioni anaerobiche a 37 ° C per diversi giorni. Ad esempio, i microrganismi a crescita rapida o esigenti possono essere incubati fino a 7 giorni.

Nell'analisi microbiologica di sostanze farmaceutiche - come i vaccini - i protocolli sono più severi. In questi casi, il brodo senza crescita non viene scartato fino a raggiungere i 14 giorni di incubazione continua.

QA

Da ogni lotto preparato, 1 o 2 provette non inoculate devono essere incubate per dimostrarne la sterilità. Deve rimanere invariato.

È anche possibile piantare ceppi noti per valutare il loro comportamento. Tra i ceppi che possono essere utilizzati ci sono:

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 o 25923, Escherichia coli ATCC 8739, Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC28CC305, Pneumomonasoniae .28 ATCC

In tutti i casi, la crescita deve essere soddisfacente nelle condizioni di atmosfera e temperatura appropriate per ciascun microrganismo.

limitazioni

-La fermentazione del glucosio provoca una diminuzione del pH del mezzo a causa della produzione di acidi. Questo può essere sfavorevole per la sopravvivenza di alcuni microrganismi sensibili all'acidità.

-Non è consigliato per il mantenimento dei ceppi, perché oltre all'acidità, i batteri esauriscono i nutrienti dopo pochi giorni con il conseguente accumulo di sostanze tossiche che rendono l'ambiente inospitale.

-Devi lavorare avendo cura di tutti i protocolli di sterilità, poiché i brodi si contaminano facilmente.

-Dopo aver preparato i brodi di soia con tripticasi, non provare a trasferire il brodo in un'altra provetta sterile, perché questo tipo di manovra è molto vulnerabile alla contaminazione.

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