TEST INCROCIATI: A COSA SERVONO, TECNICA, LOGICA, FASI - MEDICINALE

I Crossmatch sono una serie di studi di laboratorio condotti per determinare se i prodotti sanguigni di un donatore (principalmente sangue intero e globulare concentrato) sono compatibili con il sangue del ricevente.

È un test complementare aggiuntivo alla compatibilità ABO e al fattore Rh. Il motivo del crossmatching è che a volte due individui (donatore-ricevente) possono avere lo stesso gruppo ABO e Rh ma il loro sangue è comunque incompatibile.

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Tale incompatibilità è dovuta alla presenza di anticorpi contro una serie di proteine dei globuli rossi note come antigeni minori. Questi antigeni non vengono testati di routine poiché lo sono per il gruppo sanguigno (ABO) e il fattore Rh.

Questo perché gli antigeni minori sono molto meno frequenti e hanno un'espressione variabile in ogni individuo, quindi è praticamente impossibile raggrupparli in categorie come si fa con il gruppo e il fattore Rh.

Invece, i globuli rossi del donatore vengono mescolati con il siero del paziente (test di corrispondenza principale) e i globuli rossi del paziente con siero del donatore (test di corrispondenza minore) per rilevare la presenza di reazioni antigene-anticorpo.

Quando sono presenti anticorpi contro antigeni minori, nel siero del paziente o del donatore, il test si dice positivo, quindi nella maggior parte dei casi quella particolare unità di sangue non può essere trasfusa.

Gruppo ABO

Per comprendere appieno le reazioni crociate, devi prima conoscere le basi dei gruppi sanguigni.

In questo senso, la cosa più importante è sapere che il sangue può essere classificato in quattro gruppi: A, B, AB e O.

Ciascuno di questi gruppi esprime una particolare proteina (antigene) sulla superficie dei globuli rossi, che viene identificata come elemento estraneo dagli anticorpi di un potenziale recettore di un gruppo diverso.

La cosa più sorprendente delle reazioni antigene-anticorpo nell'abbinamento del sangue è che non è necessaria alcuna precedente esposizione all'antigene per l'esistenza degli anticorpi. Questo è noto come anticorpi naturali.

Anticorpi naturali

In generale, affinché gli anticorpi esistano nel corpo di un individuo, è necessario che i globuli bianchi dell'individuo siano stati precedentemente esposti all'antigene.

Ciò significa che nel primo contatto tra l'antigene estraneo e l'organismo non sono presenti anticorpi, poiché questi vengono generati successivamente, dopo il contatto iniziale. Pertanto, è impossibile per il sistema immunitario avere anticorpi contro, ad esempio, un virus particolare, se non è stato esposto ad esso in passato.

L'unica eccezione a quanto sopra sono gli antigeni anti-AB. In questi casi, la persona ha anticorpi contro l'antigene che i suoi globuli rossi non hanno, anche se non sono mai stati in contatto con i globuli rossi di un'altra persona. Questo è noto come anticorpi naturali.

Antigeni e anticorpi correlati al gruppo sanguigno

I gruppi sanguigni sono determinati nel caso del sistema ABO dalla presenza di antigeni specifici (A o B) sulla membrana dei globuli rossi e, al contrario, anticorpi contro l'antigene assente sulla membrana degli eritrociti.

Pertanto, una persona con gruppo sanguigno A esprime l'antigene A sulla superficie dei suoi globuli rossi, mentre ci sono anticorpi anti-B nel siero.

Al contrario, nei pazienti del gruppo B si trova l'antigene B mentre gli anticorpi sono anti-A.

Ora, i pazienti con sangue AB hanno entrambi gli antigeni A e B. Pertanto, non ci sono anticorpi poiché così facendo distruggerebbero i globuli rossi di quella persona.

Al contrario avviene nel gruppo O, dove la membrana eritrocitaria non presenta nessuno dei due antigeni (né A né B), mentre nel siero sono presenti anticorpi anti-A e anti-B.

Incompatibilità del gruppo ABO

Da quanto precede si può facilmente dedurre la compatibilità dei gruppi sanguigni ABO, poiché conoscendo l'antigene della membrana eritrocitaria, si conoscono automaticamente gli anticorpi nel siero. Così che:

- Blood A è compatibile con il gruppo A e il gruppo O.

- Il gruppo sanguigno B è compatibile con il sangue B e O.

- Le persone con il gruppo O possono ricevere solo sangue O (poiché hanno anticorpi anti-A e anti-B), sebbene il loro sangue sia ricevuto da tutti gli altri gruppi senza problemi poiché manca di antigeni.

- Finalmente. quelli con gruppo sanguigno AB possono ricevere sangue da tutti gli altri gruppi (A, B, O e ovviamente AB), poiché non hanno anticorpi contro nessuno degli antigeni. Tuttavia, solo le persone nel gruppo AB possono ricevere sangue AB, poiché tutti gli altri gruppi hanno anticorpi che distruggerebbero questi globuli rossi.

Antigeni minori

Come con i gruppi ABO, sulla superficie degli eritrociti è possibile trovare una serie di proteine che funzionano come antigeni allo stesso modo degli antigeni del gruppo ABO.

Tuttavia, questi antigeni non sono presenti in tutti gli individui. La loro combinazione è eterogenea e la penetranza (livello di espressione proteica) è variabile, quindi una classificazione in gruppi come quella esistente per ABO e Rh è impossibile. Da qui deriva il suo nome da "antigeni minori", noti anche come "antigeni a bassa incidenza".

Sebbene non siano frequenti, potrebbero esserci anticorpi naturali contro antigeni minori. Tra questi i più comuni sono Lewis, MNS, anti N, Kell, Duffy, anti Fyb e Kidd. Tutti responsabili di reazioni emolitiche e post-trasfusionali molto gravi.

Inoltre, può verificarsi il caso di sensibilizzazione contro antigeni minori per contatto precedente, sia con dette proteine antigeniche a causa di trasfusioni precedenti, sia per immunità crociata.

Immunità crociata

Si dice che ci sia immunità crociata quando due antigeni di due fonti diverse (ad esempio un globulo rosso e un batterio) sono molto simili, al punto che gli anticorpi contro una di queste proteine antigeniche reagiscono anche con l'altra perché sono quasi identici .

Per capirlo meglio, prendi il precedente esempio ipotetico (antigeni di un globulo rosso e un batterio). In nessuno dei due casi ci sono anticorpi naturali, ma se una persona è esposta ai batteri, genereranno anticorpi contro di essi.

Tali anticorpi reagiranno successivamente contro un globulo rosso se gli antigeni sul globulo rosso sono molto simili a quelli dei batteri che hanno indotto la formazione degli anticorpi.

Se ciò accade, i globuli rossi con quella particolare proteina antigenica non possono essere somministrati alla persona che ha gli anticorpi, poiché ci sarebbe il rigetto. Qui sta l'importanza delle reazioni incrociate.

A cosa serve il crossmatch?

Poiché è impossibile raggruppare il sangue di individui diversi in base agli antigeni minori, l'unico modo per sapere se ci sono anticorpi contro gli antigeni minori dei globuli rossi di un'altra persona nel sangue di una persona è attraverso il crossmatching. .

In quei casi in cui sono presenti anticorpi, si attiva una reazione di emolisi o agglutinazione, motivo per cui si conclude che la reazione è stata positiva; cioè, esistono anticorpi contro antigeni minori (sebbene non si sappia esattamente quale). Altrimenti il test è negativo.

Base

I crossmatch si basano sulla reazione antigene-anticorpo. Con loro è quindi possibile rilevare se nel siero di un ricevente sono presenti anticorpi contro gli antigeni dei globuli rossi del donatore (o viceversa), inducendo una reazione antigene-anticorpo.

Se non sono presenti anticorpi, non si verifica alcuna reazione e il test viene segnalato come negativo. Al contrario, se la reazione è positiva (c'è emolisi o agglutinazione durante il test) si può concludere che gli anticorpi sono presenti.

A questo proposito, è importante notare che potrebbero essere presenti anticorpi contro i globuli rossi sia nel siero donatore che in quello ricevente. Questo è il motivo per cui esistono due tipi di reazioni incrociate.

Tipi di reazioni incrociate

Nel siero del paziente possono essere presenti anticorpi contro gli eritrociti del donatore; ma può anche accadere l'opposto, cioè gli anticorpi nel siero del donatore contro i globuli rossi del paziente.

Ecco perché esistono due tipi di crossmatch:

- Maggiore crossmatch.

- Minor crossmatch.

Entrambi i tipi vengono eseguiti di routine nella banca del sangue prima della trasfusione di emoderivati, poiché se uno qualsiasi dei test è positivo c'è un alto rischio di reazioni trasfusionali che possono mettere in pericolo la vita del paziente.

Maggiore crossmatch

Questo test valuta se il siero del ricevente contiene anticorpi contro i globuli rossi del donatore.

Se ciò accade, i prodotti sanguigni non possono essere somministrati, poiché una grande quantità di anticorpi presenti nel plasma del paziente distruggerà i globuli rossi del donatore molto rapidamente, generando reazioni catastrofiche nel corpo del ricevente nel processo. Queste reazioni sono così gravi che possono essere pericolose per la vita.

Minor crossmatch

In questo caso, viene determinato se ci sono anticorpi contro i globuli rossi del ricevente nel siero del donatore.

In tal caso, gli anticorpi inizieranno a distruggere gli eritrociti del ricevente. Tuttavia, dato che la quantità di anticorpi è limitata, la reazione è meno intensa; sebbene sia ancora pericoloso.

fasi

Sia il crossmatch maggiore che quello minore si dividono in tre fasi:

- Salina.

- Termico o incubazione.

- Coombs.

Nella prima fase i globuli rossi e il siero vengono miscelati in soluzione salina. Successivamente, viene aggiunta albumina e il campione viene incubato a 37 ° C per 30 minuti per procedere infine con la fase di coombs.

Tecnica

La tecnica del crossmatch è relativamente semplice, poiché prevede l'aggiunta di globuli rossi del donatore al siero del paziente (crossmatch maggiore) e eritrociti del ricevente al siero del donatore (crossmatch minore).

Per indurre la reazione antigene-anticorpo in un tempo relativamente breve, è necessario seguire una serie di passaggi standardizzati. Questi passaggi sono riassunti in modo semplificato di seguito.

È importante notare che la sezione successiva descrive il test di compatibilità principale, sebbene i passaggi siano gli stessi per il test di compatibilità minore, ma scambiando l'origine dei globuli rossi e del siero.

Fase salina

- Aggiungere a una provetta 2 gocce di siero del ricevente (dal donatore se è il crossmatch minore).

- Prelevare un campione di globuli rossi dal donatore (dal ricevente se è il crossmatch minore).

- Lavare e centrifugare i globuli rossi.

- Risospendere in una soluzione compresa tra il 3% e il 5%.

- Porre una goccia di questa soluzione nella provetta contenente il siero del ricevente.

- Mescolare delicatamente.

- Centrifuga.

- Leggere il risultato nella spia del display.

Fase termica

- Aggiungere 2 gocce di albumina al 22% nella provetta in cui è stata completata la fase salina.

- Incubare a 37 ° C per 30 minuti.

- Centrifugare per 15 secondi.

- Leggere il risultato nella spia del display.

Fase di Coombs

- Prelevare le cellule dalla provetta e lavarle con soluzione salina.

- Elimina il supernatante.

- Aggiungere due gocce di reagente Coombs.