BLU LATTOFENOLO: CARATTERISTICHE, COMPOSIZIONE, PREPARAZIONE, USI - CHIMICA - 2025

Il lattofenolo blu o cotone blu è preparato con proprietà colorante singolo. Viene utilizzato nei laboratori clinici per colorare principalmente strutture fungine come ife, tubi germinali e spore.

Aiuta nella diagnosi presuntiva o preliminare di alcuni funghi, tuttavia è sempre consigliabile rafforzare la diagnosi con test più specifici, come test biochimici o sierologici.

Rappresentazione grafica della macchia blu lattofenolo, striscio colorato con blu lattofenolo, preparazione montata su microscopio. Fonte: public Domain Pictures.net/https://www.youtube.com/watch?v=P-kiFFZ7NvU /https://www.youtube.com/watch?v=wSZ77T5L6e8

Il blu lattofenolo è composto da acido lattico, blu di anilina, glicerina, fenolo e acqua deionizzata. Può essere preparato in laboratorio o può essere acquistato pronto all'uso. Una volta preparato è pronto per essere utilizzato, in nessun caso va diluito, poiché questa azione darà risultati terribili.

La concentrazione dei suoi componenti lo rende ideale per la colorazione delle strutture fungine, poiché il fenolo elimina il microbiota batterico che l'accompagna, mentre l'acido lattico genera un film protettivo attorno alla struttura fungina. Infine, il blu di anilina ha un'affinità per aderire alle strutture del fungo.

Base

Con il blu lattofenolo, viene eseguita una semplice colorazione delle strutture fungine di una certa cultura micologica. Si chiama semplice perché utilizza un solo colorante.

Il blu lattofenolo, oltre a colorare, funge anche da chiarificante del campione, grazie all'azione congiunta di acido lattico e fenolo, inoltre, il fenolo si comporta come un mordente e allo stesso tempo previene la lisi del microrganismo inibendo gli enzimi idrolitici che può essere presente.

Mentre l'acido lattico preserva la morfologia delle strutture del fungo.

D'altra parte, il blu di anilina ha la proprietà di aderire o legarsi a strutture contenenti chitina. Le strutture sono colorate di azzurro.

Va notato che la parete cellulare dei microrganismi fungini, in particolare le muffe, contiene chitina, motivo per cui questo colorante è ideale per colorare questi microrganismi.

caratteristiche

La soluzione di blu lattofenolo è un colorante acquoso fortemente acido, leggermente torbido, di colore azzurro. Rimane stabile se conservato tra 15 ° C e 25 ° C. La bottiglia deve essere mantenuta ben chiusa. È irritante e corrosivo per la pelle e le mucose.

Composizione

La formula per preparare un litro di blu lattofenolo è la seguente:

-250 g / L di acido lattico

-1,0 g / L blu di anilina o blu di metile

-500 g / L di glicerina

-250 g / L fenolo

-250 ml di acqua deionizzata o distillata.

Il fenolo viene sciolto nell'acqua precedentemente riscaldata. L'acido lattico e la glicerina vengono aggiunti e miscelati molto bene. Infine, il blu di anilina si dissolve. Si mescola nuovamente ed è pronto per l'uso.

Le porzioni per preparare 80 ml di soluzione di blu di lattofenolo sono:

-20 g di cristalli di fenolo

-20 ml di acido lattico

-40 ml di glicerina o glicerolo

-20 ml di acqua distillata.

Uso

Serve per colorare strutture fungine e, attraverso le caratteristiche morfologiche osservate a livello microscopico, per poter fare una diagnosi presuntiva del fungo.

Processi

Colorazione di strutture fungine di colture

- Prendete una coltura pura del fungo le cui strutture devono essere osservate.

- Lavorare preferibilmente in cappa a flusso laminare, o sotto l'accendino, utilizzando maschera e guanti, poiché è necessario rispettare le norme di biosicurezza, perché la maggior parte delle muffe è facile da spargere nell'ambiente e quindi rappresenta un pericolo per l'operatore.

- Una goccia di lattofenolo blu viene posta su un vetrino.

- Tagliare un quadratino di nastro adesivo di buona qualità e incollarlo con molta attenzione all'estremità del manico in platino sterilizzato a freddo.

- Il manico in platino viene avvicinato alla parte più superficiale della colonia fungina e la coltura viene toccata con molta attenzione, esattamente dove si trova il nastro adesivo.

- Quindi si porta sul vetrino e si adagia proprio sulla goccia di lattofenolo blu, avendo cura che il nastro sia perfettamente allungato e lubrificato con il colorante. Il manico in platino viene rimosso con molta delicatezza.

- Un'altra goccia di lattofenolo blu viene posta sul nastro e un vetrino sopra. Non applicare troppa pressione per non distruggere le strutture del fungo, poiché sono estremamente fragili. Il colorante deve essere lasciato agire per circa 3 - 4 minuti.

- Trascorso questo tempo, la preparazione è pronta per essere osservata al microscopio con ingrandimento 10X o 40X. Se è richiesta un'osservazione 100X, è necessario utilizzare olio per immersione.

- Le strutture del fungo, in generale, sono colorate di blu, ad eccezione dei funghi dematiacei che manterranno il loro caratteristico colore bruno di questo tipo di fungo.

Colorazione biologica diretta dei campioni

Se è necessario studiare un campione biologico diretto, come espettorato, pus, essudati, secrezioni, tra gli altri, questi devono avere una precedente procedura per la decontaminazione del campione. La soluzione NaOH viene utilizzata per questo.

In caso di campioni di capelli questi possono essere tinti direttamente.

Diversi peli colpiti (10 in totale) vengono prelevati dalle presunte lesioni della tinea capitis (aree alopeciche) e posti su un vetrino (da 3 a 4 peli per vetrino). Alcune gocce di lattofenolo blu vengono poste sopra e immediatamente coperte con un vetrino.

Afferrare il vetrino con una pinza e riscaldare delicatamente su un fornello. Per fare questo, fai da 3 a 4 passaggi veloci attraverso la fiamma. Osservare il microscopio a 40X e cercare le spore all'esterno o all'interno dei capelli (rispettivamente ectothrix o endothrix). Se necessario aggiungere olio per immersione e osservare a 100X.

Colorazione del tubo germinale nell'identificazione di

Dopo aver incubato la coltura presunta di Candida albicans nel siero umano per 2-4 ore a 37 ° C, una parte della soluzione viene prelevata e colorata con blu lattofenolo. La preparazione viene osservata al microscopio a 40X. Il tubo germinale è presente e le blastospore si colorano di blu brillante.

Scheda di sicurezza del lattofenolo

La National Fire Protection Association (NFPA), stabilisce la scheda di dati di sicurezza per le sostanze chimiche in termini di rischio che rappresenta secondo vari aspetti, questi sono simboleggiati da un rombo colorato e da un numero compreso tra 0- Quattro.

I rischi per la salute sono identificati in blu, l'infiammabilità in rosso, l'instabilità o reattività in giallo e qualsiasi pericolo speciale in bianco.

Salute

Il rischio per la salute rappresentato dal blu lattofenolo secondo l'NFPA è di livello 3. Ciò significa che la sostanza è estremamente pericolosa se ingerita oa diretto contatto con la pelle o le mucose.

È una sostanza altamente corrosiva e irritante.

A contatto con la pelle e le mucose provoca gravi ustioni.

Se ingerito può causare mal di testa, confusione, letargia, perdita di coscienza, arresto respiratorio e persino la morte.

infiammabilità

Secondo l'NFPA, il Lactophenol Blue è classificato di Livello 1 per l'infiammabilità. Ciò significa che brucia solo se riscaldato oltre i 94 ° C.

Instabilità

Elencato secondo l'NFPA a livello 0 (zero) in termini di reattività. Ciò significa che non ha alcun rischio di reattività, cioè è una sostanza chimicamente stabile.

Pericoli speciali

Non offre rischi speciali aggiuntivi.

Riferimenti

1. Laboratorio SAR. Blu lattofenolo. 2010. Disponibile su: labsar.com.
2. Laboratorio di chimica clinica applicata. Blu lattofenolo. 2015 Disponibile su: cromakit.es
3. Merck Laboratories. Microscopia blu lattofenolo in soluzione. 2017, disponibile su: Utenti / Equipo / Download
4. Carta di emergenza. Blu lattofenolo soluzione per la colorazione fungina. Universidad Pontificia Javeriana, Bogotá Colombia. 2014, disponibile su: javeriana.edu.co
5. González M, Diamont D, Gutiérrez B. Tecnica per la colorazione di strutture fungine con coloranti vegetali come alternativa non inquinante. Bioagro, 2011; 23 (1): 65-68. Disponibile a: Redalyc.
6. Laboratorio Himedia. Lattofenolo Cotone Blu. 2017. Disponibile su: himedialabs.com
7. Wanger A, Chavez V, Huang R, Wahed A, attore J, Dasgupta A. Test biochimici e tecniche di colorazione per l'identificazione microbica. Science Direct, 2017; 61-73. Disponibile da: Elsevier