- Caratteristiche del rosso Congo
- Preparazione
- applicazioni
- Come colorante nell'industria tessile
- Determinazione della capacità di formazione del biofilm
- Controllo di qualità degli spettrofotometri
- Preparazione dei terreni di coltura
- Identificazione di microrganismi
- Colorazione di cellule e tessuti
- Come indicatore di pH
- Riferimenti
Il rosso Congo è un colorante azoico per proteine formato dall'accoppiamento di un sale di diazonio e di un anello aromatico attivo. Questa sostanza è in grado di assorbire la radiazione elettromagnetica nello spettro visibile, motivo per cui ha un colore intenso.
È caricato negativamente. Pertanto, ha un'affinità per i componenti cellulari caricati positivamente, come alcune sostanze proteiche. Il suo colore varia a seconda del pH. In questo senso, se il mezzo è acido (<di pH3), il colore è blu intenso. Tra pH3 e pH 5,2 è fucsia (zona di svolta) e con> pH 5,2 il colore è rosso intenso.
Soluzione colloidale di Rosso Congo disidratato e Rosso Congo. Fonte: Pixinio.com e Wikipedia.com
È una sostanza molto versatile, poiché ha molteplici usi. È stato utilizzato come colorante nell'industria tessile e anche per cellule e tessuti.
Anche per realizzare terreni di coltura che misurino l'azione enzimatica, come indicatore di pH, come sostanza di controllo nella valutazione del corretto funzionamento degli spettrofotometri, nello studio della formazione di biofilm, o nella diagnosi di amiloidi.
Allo stesso modo, ha permesso di distinguere i sierotipi batterici e fungini identificando strutture specifiche nella loro parete (lipopolisaccaridi).
Caratteristiche del rosso Congo
Questa sostanza fu scoperta da Böttiger nel 1884. Si tratta di un derivato del diazonio formato dall'acido bis-diazoico della benzidina con acido naftionico. La molecola rosso Congo misura 21 Armstrong e il peso molecolare è di circa 8000 g / mol.
Il rosso Congo si caratterizza per essere solubile in acqua, e ancor di più in solventi organici come l'etanolo, formando una soluzione colloidale.
Ha un'affinità per la cellulosa, per il tessuto amiloide e per i componenti cellulari caricati positivamente.
Preparazione
Congo Red viene preparato in diverse concentrazioni a seconda della tecnica da utilizzare. La maggior parte usa il rosso Congo all'1%, 2%, 0,1%, tra gli altri.
Ad esempio, per preparare il 2% di rosso Congo, pesare 2 g di colorante alimentare disidratato e aggiungere 100 ml di acqua distillata. Viene poi conservato in una bottiglia color ambra.
applicazioni
Come colorante nell'industria tessile
Per un tempo è stato ampiamente utilizzato nell'industria tessile per il suo fissaggio nel cotone, ma attualmente è in disuso perché cancerogeno e anche perché il colore non è stabile scolorendosi per sfregamento.
Determinazione della capacità di formazione del biofilm
La capacità di formazione del biofilm dei microrganismi ha dimostrato di essere un fattore di virulenza.
In questo senso, il colorante rosso Congo viene utilizzato come metodo per determinare la formazione del biofilm. Il rosso Congo si lega agli esopolisaccaridi presenti nel biofilm. Tuttavia, rispetto ad altri metodi è il meno raccomandato a causa dell'elevato numero di falsi negativi che si verificano.
Il metodo utilizza l'agar rosso Congo, composto da agar sangue come base, glucosio (10 g / l) e colorante rosso Congo (0,4 g / l). I ceppi da valutare vengono seminati nel terreno e incubati per 24 ore a 37 ° C e successivamente incubati per 48 ore a temperatura ambiente.
Un test positivo è evidenziato se si osservano colonie cristalline di colore nero e aspetto secco.
Controllo di qualità degli spettrofotometri
Per valutare se un'apparecchiatura di misurazione dell'assorbanza o della transazione è conforme ai parametri fotometrici stabiliti dalle normative internazionali, è possibile utilizzare una tecnica semplice per stabilire se l'apparecchiatura emette risultati entro i range di accettabilità.
Una delle tecniche di valutazione è l'utilizzo del rosso Congo, basato sul punto isosbestico.
Il punto isosbestico è la lunghezza d'onda alla quale il rosso Congo emette la stessa assorbanza indipendentemente da pH, concentrazione e temperatura. Il valore di assorbanza è fisso e può essere utilizzato come riferimento.
Il punto isosbestico teorico del rosso Congo è noto per essere 541 nm. Se il valore ottenuto è diverso è noto che l'apparecchiatura presenta problemi di deriva della lunghezza d'onda e necessita di essere verificata da un tecnico specializzato.
Preparazione dei terreni di coltura
Ortiz et al … Descrivono un terreno di coltura preparato con colorante rosso Congo e carbossimetilcellulosa chiamato agar CMC, al fine di rilevare i ceppi microbici della cellulite; cioè produttori di cellulasi (endogluconeses, esoglucanases e ß-glucosidase).
Questo mezzo ha una colorazione intensa. Il colore sarà dissipato dall'azione dell'enzima endoglucanasi che rompe la struttura della carbossimetilcellulosa. Ciò suggerisce una reazione positiva.
La diminuzione della viscosità e dell'assorbanza consente di quantificare l'attività enzimatica. Ad esempio, nei ceppi di Streptomyces sp.
Identificazione di microrganismi
Il rosso Congo ha un'affinità per le strutture polisaccaridiche di alcuni ceppi, ottenendo così l'identificazione di questi microrganismi. Tra loro ci sono Escherichia coli e Shigella flexneri.
Le piastre di agar rosso Congo vengono utilizzate anche per ottenere colonie caratteristiche, come nel caso di Azospirillum sp, che dà colonie rosso scarlatto, tra le altre.
Colorazione di cellule e tessuti
Una delle applicazioni più comuni del rosso Congo è la sua utilità nella diagnosi dell'amiloidosi. Questa strana malattia consiste nell'accumulo extracellulare di una proteina anormale in vari organi. Questa proteina anormale è prodotta nel midollo osseo ed è chiamata amiloide.
Il rosso Congo ha un'alta affinità per questa sostanza. Questa proprietà è stata utilizzata per mostrare la sua presenza in sezioni di tessuto istologico. A tale scopo, il Congo Red viene utilizzato in combinazione con ematossilina / eosina.
L'unione del tessuto amiloide e del rosso Congo avviene tramite legami idrogeno non polari, tra i gruppi carbossilici e il gruppo amminico. La proteina amiloide fornisce i gruppi carbossilici (COOH) e il rosso Congo il gruppo amminico.
Il tessuto amiloide è colorato in varie tonalità che vanno dal rosa al rosso intenso se visto al microscopio ottico. In microscopi con luce doppiamente polarizzata, queste preparazioni sono osservate con una birifrangenza verde mela patognomonica.
Cioè, presentano dicroismo, poiché le fibre amieloidi sono anisotropiche. Questa osservazione conferma la diagnosi.
La colorazione dei tessuti con il rosso Congo è compatibile con altre metodologie diagnostiche, come i metodi immunocitochimici, e può anche essere ricolorata.
Come indicatore di pH
La proprietà di opporsi alle variazioni di pH è utilizzata dalla tecnica chiamata cromoendoscopia.
Questa tecnica utilizza coloranti e indicatori di pH che consentono la rilevazione di determinate patologie. Tra questi c'è l'uso del rosso Congo, che può rivelare focolai di cancro precoci nella mucosa gastrica, essendo usato come indicatore di acidità.
La tecnica si basa sul fatto che il rosso Congo a pH acido è nero. Pertanto, dopo aver posizionato una soluzione di rosso Congo sulla mucosa gastrica, verranno scelte le zone di pallore per prelevare il campione per la biopsia, cioè dove non c'è produzione di acido. Ciò suggerisce la presenza di un focus canceroso o la perdita di cellule parietali.
Riferimenti
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