- Base
- Fonte di potere
- Produzione di idrogeno solforato
- Formazione di indolo
- motilità
- Preparazione
- SIM media
- Il reagente di Kovac
- Il reagente di Erlich
- applicazioni
- Sown
- QA
- limitazioni
- Riferimenti
Il terreno SIM è un agar semisolido e differenziale, appositamente progettato per aiutare a identificare alcuni batteri, in particolare le Enterobacteriaceae. È composto da triptein, peptone, solfato di ferro, solfato di ammonio, tiosolfato di sodio e agar.
Questo mezzo permette l'esecuzione di tre importanti test: la produzione di idrogeno solforato (H 2 S), la formazione di indolo e motilità, da cui l'acronimo SIM. Per la sua grande utilità non può mancare in un laboratorio di batteriologia.
A. Mezzo SIM commerciale B. Test SIM H2S (-), indolo (-) e motilità (+) e test SIM H2S (+), indolo (-), motilità (+). Fonte: A. Foto scattata dall'autore MSc. Marielsa Gil B. Mfloayza
A differenza di altri supporti, deve essere semisolido affinché la capacità di movimento di alcuni batteri sia rilevabile. In questo senso, questo test funziona molto bene per le Enterobacteriaceae, ma non per i bastoncini Gram-negativi non fermentanti, dove sono preferiti altri metodi, come la goccia sospesa.
Il mezzo SIM permette di distinguere alcune proprietà specifiche che caratterizzano alcuni batteri rispetto ad altri. Ad esempio, Escherichia coli si distingue per essere H 2 S (-), Indolo (+) e motilità (+), mentre Proteus mirabilis è H 2 S (+), indolo (-), motilità (+).
Base
È un terreno di coltura considerato differenziale, perché il suo utilizzo distingue tra microrganismi in grado di produrre idrogeno solforato da quelli che non lo fanno; evidenzia anche quelli che formano l'indolo dal triptofano da quelli che non lo fanno, e infine differenzia i batteri mobili da quelli immobili.
Fonte di potere
Come ogni mezzo di coltura, ha elementi che forniscono i nutrienti necessari in modo che possano svilupparsi microrganismi non esigenti. Questi elementi sono rappresentati da peptoni e triptein.
Lo sviluppo del microrganismo nel terreno è essenziale per poter osservare la presenza o l'assenza delle caratteristiche che questo terreno valuta.
Produzione di idrogeno solforato
La lettera S della sigla SIM si riferisce alla produzione di idrogeno solforato (H 2 S). I batteri in grado di formare idrogeno solforato assorbiranno lo zolfo dal tiosolfato di sodio.
Una volta formato l'H 2 S -gas incolore- reagisce con il sale di ferro presente nel mezzo formando solfuro ferroso, ben visibile (precipitato nero). I batteri che non formano H 2 S, lasciano il mezzo del colore originale (beige).
La presenza del precipitato nero può ostacolare l'interpretazione della motilità. Tuttavia, la maggior parte delle Enterobacteriaceae che producono H 2 S sono note per essere positivamente mobili, come Salmonella, Proteus e Citrobacter. Inoltre, il precipitato nero che copre quasi tutto il terreno suggerisce una motilità positiva.
Formazione di indolo
La seconda lettera della sigla SIM è "I", che rappresenta la formazione dell'indolo.
In questo senso il triptein, oltre ad essere una fonte di nutrienti, svolge un'altra fondamentale funzione. Questo peptone è ricco di un amminoacido chiamato triptofano, quindi può mostrare batteri che producono triptofanasi.
Questo enzima è responsabile della scissione dell'amminoacido triptofano, con la conseguente formazione di indolo (sostanza incolore), acido piruvico e ammonio.
Ecco perché, per mostrare questa reazione, è necessario aggiungere una sostanza rivelatrice (il reagente di Ehrlich o il reagente di Kovac). O reagisce con l'indolo, formando una sostanza a forma di anello rosso-fucsia sulla superficie dell'agar. Se compare l'anello fucsia, il test dell'indolo viene interpretato come positivo.
I batteri che non possiedono questo enzima non formeranno l'anello ed è interpretato come un test dell'indolo negativo.
È importante notare che il test dell'indolo dovrebbe essere l'ultimo ad essere interpretato, poiché una volta aggiunto il reagente, il terreno diventa torbido, rendendo difficile la visualizzazione della motilità.
motilità
Infine la lettera "M" della parola SIM significa motilità. Per valutare la motilità, questo terreno è strategicamente semisolido, in quanto questa caratteristica è essenziale per poter osservare se c'è o meno movimento batterico. I batteri che possiedono flagelli sono quelli che danno questo test positivo.
Un test positivo sarà evidente quando si osserva torbidità, sia nell'inoculo iniziale, sia intorno ad esso. Considerando che, i batteri non mobili si sviluppano solo nel percorso dell'inoculo iniziale.
Preparazione
SIM media
Pesare 30 g di terreno disidratato e sciogliere in un litro di acqua distillata. La miscela viene lasciata riposare per 5 minuti e poi riscaldata fino all'ebollizione, mescolando frequentemente fino a completa dissoluzione.
Distribuire la miscela in provette con tappi di cotone e autoclave a 121 ° C per 15 minuti. Rimuovere il portaprovette dall'autoclave e lasciare solidificare in posizione verticale, in modo che il terreno abbia la forma di un blocco.
Per la sua conservazione va conservato in frigorifero fino al suo utilizzo. Il terreno preparato deve avere un pH finale di 7,3 ± 0,2.
Al momento dell'inoculo del terreno, deve essere a temperatura ambiente. Il colore centrale è il beige.
Il reagente di Kovac
Misura 150 ml di alcol amilico o isoamilico o butilico. (Usa uno dei tre menzionati).
Sciogliere 10 g di p-dimetilamminobenzaldeide. Quindi aggiungere lentamente 50 ml di acido cloridrico concentrato.
Il reagente pronto per l'uso è incolore o giallo chiaro. Va conservato in una bottiglia color ambra e conservato in frigorifero. Non utilizzare se diventa marrone scuro; ciò indica che è danneggiato. Questo reagente è preferito quando si tratta di Enterobacteriaceae.
Il reagente di Erlich
Pesare 2 g di p-dimetilamminobenzaldeide e sciogliere in 190 ml di alcol etilico assoluto e mescolare lentamente con 40 ml di acido cloridrico concentrato. Conservare allo stesso modo il reagente di Kovac. Il reagente di Ehrlich è utilizzato principalmente per i batteri non fermentanti e anaerobici.
applicazioni
Il mezzo SIM è molto utilizzato nei laboratori di batteriologia. Il suo vantaggio è che tre caratteristiche essenziali possono essere osservate nella stessa provetta nell'identificazione delle Enterobacteriaceae.
Sown
Il modo corretto di seminare questo terreno è utilizzare l'ago, con il quale viene prelevata una porzione della colonia pura da studiare e inserita verticalmente al centro del terreno. Dovrebbe essere eseguito un singolo affondo. La foratura non deve raggiungere il fondo del tubo, la cosa corretta è coprire solo i due terzi della profondità.
La ripetizione dell'inoculo non è raccomandata, poiché ciò può portare a false interpretazioni della motilità positiva. Il terreno inoculato viene incubato in aerobiosi a 37 ° C per 24 ore.
Terminato il tempo, si osserva se c'è stata o meno produzione di H 2 S e si legge la motilità. Infine l'indolo viene rivelato, aggiungendo da 3 a 4 gocce del reagente di Ehrlich o Kovac, mescolare delicatamente e interpretare.
Fonte: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosi microbiologica. 5a ed. Editoriale Panamericana SA Argentina.
QA
Come controllo di sterilità, una o due provette vengono incubate senza inoculazione in un forno a 37 ° C per 24 ore. Si prevede che dopo questo periodo non ci sia crescita o cambiamento di colore.
Come controllo di qualità, possono essere utilizzati ceppi certificati noti, come: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.
I risultati attesi sono: Escherichia coli H 2 S negativo, indolo e motilità positiva, Enterobacter aerogenes solo motilità positiva, Salmonella typhimurium H 2 S e motilità positiva, con indolo negativo. Proteus vulgaris tutti positivi, mentre Klebsiella pneumoniae e Shigella sono tutti negativi.
limitazioni
-Alcuni ceppi di Morganella morganii, tra gli altri ceppi, possono produrre un pigmento brunastro in questo terreno a causa della produzione di melanina, questo non deve essere confuso con il precipitato di solfuro ferroso. In professionisti inesperti questa situazione può generare falsi positivi nell'interpretazione del test H 2 S.
-Batteri aerobici rigidi cresceranno solo sulla superficie del tubo, rendendo difficile l'interpretazione della motilità.
Riferimenti
- BD Laboratories. BBL SIM Medium. 2008. Disponibile su: bd.com
- Neogen Laboratories. SIM media. Disponibile su: sicurezza alimentare
- Difco Francisco Soria Melguizo. SIM media. Disponibile su: http://f-soria.es
- Brizuela-Lab Laboratory. SIM media. Disponibile su: .brizuela-lab.com
- Britannia Laboratories. SIM media. 2015, disponibile su: studyres.es/doc
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosi microbiologica. 5a ed. Editoriale Panamericana SA Argentina.