MEZZO STUART: FONDOTINTA, PREPARAZIONE E USI - BIOLOGIA - 2025

Il terreno Stuart è un agar semisolido o brodo senza nutrienti, utilizzato per il trasporto di campioni biologici. Il suo scopo è mantenere vitali i ceppi presenti nel campione per un certo tempo, ma senza aumentare la popolazione microbica.

È stato creato da Moffet, Young e Stuart nel 1948 e successivamente modificato da Toshach e Patsula. È composto da glicerofosfato di sodio, tioglicolato di sodio, cloruro di calcio e agar-agar. Quest'ultimo è presente nel mezzo semisolido e assente nel liquido. Alcuni laboratori aggiungono blu di metilene ad esso.

Culturette con trasporto Stuart. Fonte: a cura di: CDC / Dr. Gilda Jones, per gentile concessione: Public Health Image Library

Sono generalmente utilizzati quando non è possibile seminare immediatamente il campione. In questo caso, il campione viene posto nel mezzo di trasporto, mentre viene trasferito al laboratorio che elaborerà la coltura.

In questo modo si garantisce che i microrganismi presenti rimangano vivi fino a quando non vengono inoculati nei corrispondenti terreni di coltura.

Inizialmente, il suo utilizzo era destinato al trasporto di campioni uretrali o vaginali dove si sospettava la presenza di Neisseria gonorrhoeae. Successivamente, si sono resi conto che la sua utilità poteva essere più ampia.

Il terreno Stuart si è rivelato molto efficiente nella conservazione di microrganismi labili e esigenti come Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae, Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae, Corynebacterium diphteriae, Bordetella pertusis, tra gli altri. Oltre ad altri microrganismi non fastidiosi come gli Enterobatteri.

Fondamentalmente, il terreno Stuart impedisce l'essiccazione del campione, mantiene l'equilibrio osmotico e preserva i microrganismi a un pH ideale. D'altra parte, strategicamente questo mezzo non contiene sostanze nutritive, impedendo così ai microrganismi di moltiplicarsi.

In commercio esistono speciali dispositivi di trasporto dei campioni che contengono questo o altri mezzi di trasporto, chiamati culturette. Possono anche essere preparati in laboratorio.

Base

Lo scopo della modalità di trasporto Stuart è mantenere i campioni il più vicino possibile alla loro condizione originale fino a quando non vengono elaborati.

Il sodio glicerofosfato e il cloruro di calcio sono un sistema tampone che funziona mantenendo il pH e l'osmolarità.

Nel frattempo, il tioglicolato di sodio agisce come agente riducente e nel caso di contenimento di agar, gli conferisce una consistenza semisolida, per ritardare l'ossigenazione del terreno. Infine, il blu di metilene è un indicatore di ossidazione, cioè rileva la presenza di ossigeno.

Il terreno semisolido con indicatore redox è ideale per il trasporto di campioni in cui si sospetta la presenza di batteri anaerobici.

Caratteristiche del mezzo di trasporto

Il mezzo Stuart, come tutti i mezzi di trasporto, soddisfa determinate caratteristiche, tra cui:

-Mantiene i ceppi microbici vitali presenti senza moltiplicarsi.

-Non contiene sostanze nutritive; I suoi composti hanno lo scopo di mantenere il campione idratato, in condizioni di pH e osmolarità adeguate.

-Inibisce l'autolizzato di alcuni microrganismi delicati, come lo Pneumococco.

-Il suo utilizzo è temporaneo, non dovrebbe essere troppo lungo.

Preparazione

Mezzo Stuart semisolido con indicatore redox

Preparazione domestica

ingredienti

Sodio glicerofosfato 10 gr

Sodio tioglicolato 1.0 gr

Calcio cloruro 0,1 gr

Blu di metilene 0.002 gr

Agar-agar 3 gr

Acqua distillata 1 L

Mescolare i componenti e riscaldare fino a completa dissoluzione. Versare in provette o tamponi speciali. Vengono introdotti nell'autoclave e sterilizzati a 121ºC per 15 minuti. Lasciate raffreddare i tubi in posizione verticale (a forma di blocco). Conservare a temperatura ambiente.

Preparazione con terreno commerciale

Pesare 14,1 g del terreno in 1 litro di acqua distillata. Scuotendo spesso il calore fino a completa dissoluzione, può essere bollito. Il resto della procedura come già descritto.

Il terreno disidratato è color crema e la superficie preparata dovrebbe essere blu. Ciò è dovuto alla presenza del blu di metilene.

Il pH del mezzo deve essere regolato a 7,4 ± 0,2

Stuart Medium modificato liquido (fatto in casa)

ingredienti

Sodio glicerofosfato 10 gr

Sodio tioglicolato 1 gr

Calcio cloruro biidrato 0,1 gr

Acqua distillata 1000 ml

Ha gli stessi ingredienti del semisolido, ma non ha agar o blu di metilene. In questo caso, i componenti vengono miscelati senza riscaldamento e 0,5 ml vengono distribuiti in provette da 16 x 125 mm con tappi a vite.

Viene sterilizzato in autoclave a 121 ° C per 10 minuti. Per il campionamento, utilizzare tamponi di dacron se il campione è per PCR o rayon se è per coltura.

Le provette vengono conservate a temperatura ambiente.

applicazioni

In commercio esistono speciali dispositivi di trasporto dei campioni chiamati culturette; Questo dispositivo è un tubo allungato e sottile che ha un tampone all'interno e all'estremità c'è un segmento che contiene il mezzo Stuart semisolido o liquido.

Il dispositivo viene aperto e il campione viene prelevato con il tampone. Viene quindi reintrodotto nella provetta fino a quando la punta del tampone viene inserita nel mezzo di trasporto semisolido; alcuni portano una spugna di poliuretano impregnata del mezzo liquido Stuart, con la quale si conserva il campione mantenendolo umido.

Nel caso in cui si sospetti la presenza di microrganismi delicati, utilizzare tamponi di cotone con carbone per raccogliere il campione.

I campioni che possono essere prelevati con tamponi o tamponi e trasferiti in questo terreno sono essudati faringei, tamponi rettali e varie secrezioni, tra cui: vaginale, uretrale, ferita, oculare, orecchio e ascesso.

Durante il trasferimento del campione nel mezzo di trasporto al laboratorio, è necessario evitare di sottoporre il mezzo a condizioni ambientali estreme (troppo freddo o troppo caldo). Evitare anche cambiamenti improvvisi della pressione atmosferica.

Il tempo in cui il terreno è in grado di mantenere un microrganismo vitale dipenderà dal ceppo in questione. Ad esempio, per i microrganismi del genere Neisserias e Haemophilus possono rimanere vitali fino a 24 ore, ma ceppi come Salmonella o Shigella possono durare giorni e persino settimane.

Se si stima che l'elaborazione del campione possa richiedere più di 4 giorni, è preferibile congelare il campione a -70 ° C.

Identificazione del campione nei mezzi di trasporto

Il mezzo di trasporto preparato o la coltura commerciale deve avere un'etichetta su cui saranno apposte le seguenti informazioni:

Nome e cognome del paziente: evita la confusione del campione.

Numero di identificazione: è conveniente mantenere un ordine al lavoro.

Fonte di raccolta del campione: aiuta il batteriologo a scegliere i terreni di coltura appropriati.

Medico curante: a volte è necessario per eventuali consultazioni.

Data e ora del prelievo del campione: è necessario per l'accettazione o il rifiuto del campione in base al tempo intercorso tra il prelievo del campione e il ricevimento in laboratorio.

Altre informazioni che sarebbe molto utile allegare sono:

La diagnosi presuntiva: guida l'aggiunta di speciali terreni di coltura in base alla diagnosi sospetta.

Trattamento antibiotico: è utile essere allegato all'antibiogramma.

Tutte queste informazioni sono fondamentali per garantire una corretta elaborazione del campione.

QA

Per valutare le prestazioni del terreno Stuart, i ceppi noti possono essere inoculati e conservati a 25 ° C, come: Bordetella pertussis ATCC 9340, Haemophilus influenzae ATCC 19418, Neisseria gonorrhoeae ATCC 19424, Neisseria meningitidis ATCC 13090, Streptococcus pneumoniae ATCC 6301.

In tutti i casi è previsto il recupero del microrganismo in questione, conservato per 24 ore.

D'altra parte, possono essere utilizzati altri ceppi come: Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Streptococcus pyogenes ATCC 12344, Enterococcus faecalis ATCC 33186, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 ed Escherichia coli ATCC 11775.

In tutti i casi, è previsto un recupero abbondante fino a 96 ore.

limitazioni

Alcuni studi assicurano che il glicerofosfato presente nel terreno Stuart possa essere metabolizzato da alcuni coliformi, tra gli altri batteri Gram negativi, e quindi moltiplicarsi in questo terreno.

Questo rischio aumenta quanto più a lungo viene ritardata l'elaborazione del campione. Allo stesso modo, l'esposizione delle temperature medio-alte Stuart durante il trasporto influisce su questo.

Riferimenti

1. "Mezzo di trasporto (microbiologia)." Wikipedia, l'enciclopedia libera. 13 aprile 2018, 10:36 UTC. 1 aprile 2019 Disponibile su: es.wikipedia.org
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