BRODO DI SELENITE: FONDOTINTA, PREPARAZIONE E USI - BIOLOGIA - 2024

La selenite è un terreno di coltura liquido selettivo. È stato progettato da Leifson per l'arricchimento di campioni in cui si sospetta la presenza di batteri enteropatogeni del genere Salmonella.

Questo terreno è conforme ai requisiti dell'American Public Health Association (APHA) e pertanto è accettato per le indagini sulla presenza di Salmonella in campioni di feci, urina, alimenti liquidi o solidi, acqua, tra gli altri.

Brodo di selenite. Fonte: foto scattata dall'autore MSc. Marielsa gil

La sua composizione chimica favorisce il recupero di questi microrganismi e a sua volta inibisce la crescita di altri. È principalmente tossico per la maggior parte dei batteri appartenenti alla famiglia delle Enterobacteriaceae. Tuttavia, consente anche il recupero dei ceppi di Shigella e non inibisce la crescita di Pseudomonas e Proteus.

È composto da selenito di sodio idrogeno anidro, fosfato di sodio anidro, peptoni e lattosio. Esiste anche una variante a cui viene aggiunta la cistina, da cui il nome brodo selenite-cistina.

Attualmente si preferisce l'utilizzo di brodo selenite-cistina, poiché si ottiene una percentuale di recupero di Salmonella maggiore, equivalente a quella osservata con altri terreni selettivi per lo stesso scopo, come il brodo tetrationato di sodio.

Base

I peptoni contenuti nel brodo fungono da nutrienti per il corretto sviluppo dei microrganismi. I ceppi di Salmonella utilizzano i peptoni come fonte di azoto, vitamine e aminoacidi.

Il lattosio è il carboidrato fermentabile, mentre il selenito di sodio è la sostanza inibitoria che blocca la crescita dei batteri Gram positivi e della maggior parte dei batteri presenti nella flora intestinale, in particolare quelli della famiglia delle Enterobacteriaceae. Il fosfato di sodio è il tampone che stabilizza il pH del mezzo.

Nel caso della variante di brodo di selenite contenente L-cistina, questo composto aggiuntivo è un agente riducente che riduce al minimo la tossicità della selenite, aumentando il recupero della Salmonella.

Preparazione

-Brodo di selenite

Se hai i componenti della miscela, puoi pesare:

4 g di selenito di sodio idrogeno anidro.

10 g di fosfato di sodio anidro.

5 g di peptoni.

4 grammi di lattosio.

Sciogliere i composti in 1 litro di acqua distillata sterile. Può essere leggermente riscaldato per dissolversi completamente.

Alcuni laboratori espongono il terreno per 10 minuti a vapore fluido per sterilizzarlo, poiché non si dovrebbe usare un'autoclave. Se il terreno è sterilizzato, può essere conservato in frigorifero fino al momento dell'uso.

Può anche essere preparato non sterile e servito direttamente da 10 a 15 ml in provette sterili.

In questo caso, dovrebbe essere lasciato riposare e utilizzato immediatamente. Poiché il terreno non è sterile, non può essere conservato in frigorifero per un uso successivo.

- Preparazione dell'ambiente commerciale

Se il terreno commerciale è disponibile, pesare 23 g del terreno disidratato e scioglierlo in un litro di acqua distillata sterile. Riscaldare brevemente per terminare lo scioglimento. Non autoclavare. Servire asetticamente 10 o 15 ml in provette sterili.

Il pH finale del mezzo dovrebbe essere 7,0 ± 0,2.

Va notato che il colore del terreno disidratato è beige e la preparazione è ambra chiara e traslucida.

Variante di brodo di selenite-cistina

Contiene gli stessi composti del brodo di selenite, ma vengono aggiunti 10 mg di cistina. Il resto della procedura è esattamente lo stesso descritto sopra.

applicazioni

Questo terreno è speciale per essere utilizzato negli studi epidemiologici, nei casi in cui la malattia non è nella sua fase acuta, pazienti asintomatici o portatori sani.

L'isolamento del genere Salmonella è generalmente difficile, poiché di solito sono solo campioni scarsamente contaminanti. Essendo in piccole quantità, è facilmente sovrapposto alla crescita di altri generi batterici che si trovano in maggiore quantità.

D'altra parte, la materia prima con cui sono realizzati gli alimenti trasformati è spesso esposta al calore, ai processi di disidratazione, all'uso di disinfettanti, radiazioni e conservanti, tra gli altri.

Pertanto le Salmonelle presenti nella materia prima vengono maltrattate sottoponendo il prodotto ai suddetti processi industriali. Allo stesso modo, nel caso di campioni clinici come le feci, i ceppi possono essere deboli se provengono da pazienti che sono stati trattati con antibiotici.

Pertanto, qualsiasi campione in cui si sospetta la presenza di Salmonella deve essere pre-arricchito in brodo di lattosio e successivamente arricchito in brodo di selenite per ottimizzarne il recupero in terreni selettivi, come agar SS, agar xilosio, lisina desossicolato (XLD ), agar enterico Hektoen (HE) e agar verde brillante, tra gli altri.

Sown

Per i campioni di feci, prelevare 1 g di campione e sospendere in una provetta con 10-15 ml di brodo di selenite. Se le feci sono liquide, prendi 1 ml e sospendi nel brodo. Per i tamponi rettali, scaricare il materiale del tampone nel brodo.

Nei campioni di cibo solido prelevare 1 gr e sospendere nel brodo di selenite.

Negli alimenti liquidi mescolare in parti uguali con il brodo di selenite a doppia concentrazione.

Per i campioni di urina, centrifugare, scartare il surnatante, prelevare tutto il sedimento e sospenderlo nel brodo di selenite.

I brodi vengono incubati a 37 ° C per 24 ore di incubazione. La crescita batterica è evidenziata dalla torbidità. È inoltre possibile includere una provetta aggiuntiva per campione per l'incubazione a 42 ° C. Successivamente, semina terreno solido selettivo dal brodo di selenite.

QA

Per controllare la sterilità, un brodo di selenite da ciascun lotto non inoculato viene incubato a 37 ° C per 24 ore. Si prevede che non vi sia torbidità o cambiamento di colore del mezzo.

I ceppi noti possono essere utilizzati per controllare il corretto funzionamento del terreno, come ad esempio:

Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 e Proteus mirabilis ATCC 43071.

I risultati attesi sono:

• Per i primi tre ceppi batterici, la crescita deve essere soddisfacente.
• Per inibizione parziale di Escherichia coli.
• Per Proteus crescita moderata.

limitazioni

Il brodo di selenite è tossico per la pelle umana, pertanto è necessario evitare il contatto diretto.

Riferimenti

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