BRODO LATTOSO: FONDOTINTA, PREPARAZIONE E UTILIZZI - BIOLOGIA - 2025

Il brodo di lattosio è un mezzo di coltura liquido non selettivo utilizzato principalmente come pre-arricchimento nell'isolamento dei ceppi di Salmonella dall'analisi microbiologica agli alimenti trasformati, ai latticini o all'acqua. Ciò è raccomandato dalla Commissione internazionale sulle specifiche microbiologiche per gli alimenti (ICMPF).

Il terreno contiene digest enzimatico di gelatina, estratto di carne e lattosio, sostanze necessarie per la crescita batterica. Inoltre il lattosio è un carboidrato fermentabile, quindi alcuni coliformi sono in grado di scomporlo con la produzione di gas.

Brodi lattati con torbidità. Fonte: foto scattata dall'autore MSc. Marielsa gil

Per questo motivo il brodo di lattosio è raccomandato dall'American Public Health Association (APHA) per lo studio presuntivo dei batteri coliformi totali e fecali, qualificandolo come un'ottima alternativa in sostituzione del brodo di triptosio lauril solfato nella tecnica standard del numero più probabile (MPN). ), utilizzato per l'analisi microbiologica di campioni di alimenti, latte e acque superficiali, sotterranei, ricreativi, domestici e industriali.

Base

Per l'analisi microbiologica di alcuni campioni, la fase di pre-arricchimento è essenziale per poter recuperare un microrganismo specifico che può trovarsi in quantità molto basse o in condizioni sfavorevoli che ne violano o riducono al minimo la sua vitalità.

È il caso degli alimenti essiccati e trasformati, possibilmente contaminati da Salmonellas sp. In questi casi, se i batteri sono presenti, hanno subito abusi fisici e chimici durante il processo di produzione del prodotto.

In modo tale che i microrganismi siano esposti a fattori avversi come la disidratazione, l'esposizione a prodotti inibitori o tossici e la sovrapposizione generata dalla presenza di altri batteri in quantità maggiore, tra gli altri.

In questo senso, il brodo di lattosio ha un effetto riparatore sulle strutture danneggiate del microrganismo, facendolo recuperare e riprodursi, in modo tale da poter essere rilevato.

Allo stesso modo, il brodo di lattosio ha la capacità di diluire le sostanze inibitorie che possono comprometterne la vitalità, consentendone lo sviluppo. Inoltre, la composizione nutrizionale del brodo di lattosio è strategica per favorire la crescita di Salmonella sp rispetto ad altri microrganismi.

Per l'identificazione finale, deve essere sottocolturato ad altri mezzi di coltura definitivi.

D'altra parte, la composizione del mezzo consente anche di rilevare microrganismi fermentanti il ​​lattosio che producono gas.

Preparazione

Per preparare un litro di brodo di lattosio, pesare 13 grammi del terreno disidratato e sciogliere in 1000 ml di acqua distillata.

Per aiutare a sciogliere il terreno nell'acqua, la soluzione può essere riscaldata un po ', ma non troppo.

Una volta omogenea, la soluzione viene preparata come segue: se il brodo deve essere utilizzato per la ricerca di coliformi, viene preparato un rack di provette, in cui viene inserita capovolta una provetta di fermentazione Durham.

Il tubo di Durham è un dettaglio molto importante, perché permetterà la rilevazione della formazione di gas, un dato di grande pregio nella ricerca dei coliformi.

Una volta pronte le provette, vengono versati 10 ml del brodo di lattosio, quantità che deve essere sufficiente a coprire l'intera provetta Durham.

Se il brodo di lattosio deve essere utilizzato come brodo di pre-arricchimento, non è necessario posizionare una provetta di fermentazione Durham. In questo caso è necessaria una maggiore quantità di terreno (225 ml), che verrà servito in bottiglie da 500 ml, a bocca larga e con tappo a vite termoresistente.

Successivamente, le provette o le beute vengono sterilizzate in autoclave a 121 ° C per 15 minuti.

Il mezzo deve rimanere a un pH finale di 6,9 ± 0,2 a 25 ° C.

I brodi si conservano in frigorifero fino al momento dell'uso.

Prima dell'uso, i brodi devono essere portati a temperatura ambiente.

D'altra parte, il brodo di lattosio può essere preparato anche in doppia concentrazione.

Alcuni laboratori aggiungono il bromocresolo viola al brodo di lattosio come indicatore di pH, per mostrare le provette dove il lattosio è stato fermentato a causa del cambiamento di colore. In questo caso il brodo assume un colore violaceo e se c'è fermentazione diventa giallo.

applicazioni

Nei laboratori di microbiologia, il brodo di lattosio è ampiamente utilizzato in quanto è un mezzo relativamente economico che offre risultati affidabili e rapidi (24-48 ore).

Può essere utilizzato per l'analisi dei coliformi totali e fecali negli alimenti e nell'acqua o come brodo di pre-arricchimento per Salmonella.

Pre-arricchimento

Il pre-arricchimento è un passaggio prima dell'arricchimento del campione, che migliora notevolmente il recupero dei batteri del genere Salmonella negli alimenti trasformati.

Per fare ciò, il campione di cibo solido (25 grammi) o liquido (25 ml) viene seminato in 225 ml di brodo di lattosio, incubando per 24-48 ore. Successivamente, sarà sotto-coltivato in un mezzo arricchito come il brodo di selenite cistina o il brodo tetrationato. Quindi passa ai supporti selettivi XLD e SS.

Analisi dei coliformi totali e fecali

È un ottimo mezzo come indicatore di contaminazione fecale.

Per questo motivo il brodo di lattosio è ideale per la fase presuntiva dello studio dei coliformi con il metodo del numero più probabile.

Per i campioni in cui si sospetta una grande quantità di coliformi, verrà inoculata una quantità minore (1ml), mentre per i campioni in cui si sospetta una minore quantità di coliformi, verrà inoculato un volume maggiore di campioni (10 ml).

Per l'analisi si effettuano diluizioni ^10-1 , 10 ^-2 , ^10-3 , formando una batteria di 3-5 tubi per ogni concentrazione utilizzata.

Da ogni diluizione, lo stesso volume viene seminato nei brodi di lattosio.

Le provette vengono incubate per 24 ore. I brodi negativi vengono incubati per altre 24 ore.

L'interpretazione dei risultati viene fatta osservando due caratteristiche: la prima è la presenza o l'assenza di torbidità e poiché questo mezzo non contiene un indicatore di pH, non ci sarà cambiamento di colore.

Il secondo è la produzione o meno di gas. Il gas è facilmente evidenziato nel tubo di Durham dalla comparsa di una o più bolle d'aria al suo interno.

È considerato positivo se si osservano entrambe le caratteristiche, cioè la torbidità con la produzione di gas. Le provette positive devono essere nuovamente seminate in terreni di conferma (brodo di bile verde brillante al 2% e brodo EC).

Controllo di qualità del mezzo

- Nella preparazione del terreno, è importante non dimenticare di posizionare i tubi Durhams se lo scopo dello stesso è quello di studiare i coliformi.

- Non surriscaldare il mezzo prima della sterilizzazione.

- Distribuire in provette prima di sterilizzare, mai dopo.

- Non utilizzare se il mezzo ha più di 3 mesi.

- Non utilizzare se si osservano cambiamenti nelle caratteristiche usuali del mezzo.

- Quando si prepara un lotto di brodo di lattosio, testarne la qualità seminando ceppi noti come Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Citrobacter freundii e Klebsiella pneumoniae. Crescono molto bene, con la produzione di gas (controllo positivo).

- Può includere anche Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium o Enterococcus faecalis, che crescono bene, ma senza produzione di gas (Controllo negativo).

- Va notato che il colore originale del terreno disidratato è beige e quello del terreno preparato è giallo molto chiaro e trasparente. Se si osserva un cambiamento di colore o aspetto, potrebbe deteriorarsi.

Riferimenti

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