- Base
- -Potenza nutritiva
- -Selettività del mezzo
- -Potenza differenziale
- Tipiche colonie di Shigella
- Colonie tipiche di Salmonella
- Produzione di H
- -Cloruro di sodio, agar e rosso fenolo
- Preparazione
- applicazioni
- Tipi di campioni
- Feci
- Cibo
- acqua
- Condizioni di impianto e identificazione
- QA
- Pensieri finali
- Riferimenti
L' agar XLD o il terreno agar xilosio lisina desossicolato è una coltura solida selettiva e differenziale per l'isolamento di enteropatogeni. Taylor ha progettato la formula di agar XL (xilosio, lisina) per migliorare l'isolamento del genere Shigella.
Ha osservato che questo genere è stato inibito nella maggior parte dei terreni destinati all'isolamento di enteropatogeni. Successivamente, sono stati aggiunti desossicolato di sodio, tiosolfato di sodio e citrato di ammonio ferrico per aumentarne la selettività. Questa formula si è dimostrata utile sia per l'isolamento di Shigella che per Salmonella.
Differenze delle colonie di Shigella, Salmonella e coliformi su XLD agar. A. Shigella sp, B. Salmonella sp, C. Coliforms. Fonti: A. Di: CDC / Amanda Moore, MT; Todd Parker, PhD; Audra Marsh, per gentile concessione: Public Health Image Library B. https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/1/1f/Salmonella_species_growing_on_XLD_agar_-_Showing_H2S_production_-_Detail.jpg C. Di: CDC / Dr. JJ farmer, per gentile concessione: Public Health Image Library
L'agar XLD è composto da estratto di lievito, sodio desossicolato, xilosio, lisina, lattosio, saccarosio, tiosolfato di sodio, citrato di ammonio ferrico, cloruro di sodio, rosso fenolo e agar. XLD Agar e SS Agar duo sono utilizzati nella maggior parte dei laboratori di batteriologia per studiare campioni fecali per Shigella e Salmonella.
Altri laboratori preferiscono la combinazione di CHROMagar Salmonella e XLD agar, tra le altre opzioni disponibili. Questi duetti possono essere preparati in doppie piastre di Petri. Da un lato pongono l'agar XLD e sul lato opposto l'altro terreno scelto.
Base
-Potenza nutritiva
L'agar XLD contiene un estratto di lievito, che funge da fonte di nutrienti per i microrganismi che crescono su questo agar. Inoltre la presenza di carboidrati (xilosio, saccarosio e lattosio) fornisce energia ai batteri che possono fermentarli.
-Selettività del mezzo
Come sostanza inibitrice, presenta sodio desossicolato; Ciò impedisce la crescita di batteri Gram positivi, conferendo al terreno un carattere selettivo.
-Potenza differenziale
Tipiche colonie di Shigella
Come già accennato, l'agar XLD contiene xilosio; Questo carboidrato viene fermentato da tutti i batteri che crescono in questo terreno ad eccezione del genere Shigella.
Questa è una delle caratteristiche che gli conferiscono il suo carattere differenziale, poiché le colonie di Shigella si distinguono dalle altre sviluppando colonie rosse, mentre gli altri batteri producono colonie gialle.
Colonie tipiche di Salmonella
Il genere Salmonella fermenta anche lo xilosio, generando inizialmente colonie gialle. Tuttavia, dopo aver esaurito il carboidrato xilosio, attacca la lisina per il suo enzima lisina decarbossilasi. La decarbossilazione della lisina genera alcali che trasformano il colore della colonia e del mezzo circostante al rosso originale.
Questo comportamento è svolto solo dalla Salmonella, poiché i coliformi che decarbossilano la lisina non possono alcalinizzare il terreno. Questo perché i coliformi fermentano anche il lattosio e il saccarosio presenti; quindi, la produzione di acidi è molto alta, lasciando la colonia gialla in questi batteri.
Va notato che il genere Salmonella non fermenta il saccarosio o il lattosio.
Produzione di H
L'agar XLD consente anche il rilevamento delle specie di Salmonella che producono H 2 S; Per questo, si basa sulla fonte di zolfo rappresentata dal tiosolfato di sodio e da uno sviluppatore di reazione, che è citrato di ammonio ferrico.
Quest'ultimo reagisce con H 2 S (gas incolore) e forma un visibile precipitato nero insolubile di solfato di ferro. In questo senso, le caratteristiche delle colonie di salmonella saranno rosse con un centro nero.
Va notato che per l'H 2 S reazione di formazione avvenga , è necessario un pH alcalino. Questo è il motivo per cui altre Enterobacteriaceae che formano H 2 S non possono o lo fanno male in questo ambiente, poiché l'elevata acidità prodotta dalla fermentazione dei carboidrati presenti inibisce o ostacola la reazione.
-Cloruro di sodio, agar e rosso fenolo
Infine, il cloruro di sodio mantiene l'equilibrio osmotico; l'agar è l'agente solidificante e il rosso fenolo rileva i cambiamenti di pH, cambiando il colore delle colonie e del terreno.
Preparazione
Pesare 55 g di terreno XLD disidratato e sciogliere in 1 litro d'acqua. Riscaldare e mescolare il composto fino a raggiungere il punto di ebollizione. Non surriscaldare, poiché il calore danneggia il mezzo e crea un precipitato che altera la morfologia delle colonie tipiche.
Questo mezzo non deve essere autoclavato. Quando si dissolve, deve essere passato a bagnomaria a 50 ° C. Quando si raffredda, va servito direttamente su piastre Petri sterili. Possono essere versati in piatti singoli o doppi. Si lasciano solidificare e si conservano in frigorifero fino al momento dell'uso.
Temperare prima dell'uso. Trattandosi di un terreno non sterile, si consiglia di prepararlo in prossimità della data di utilizzo.
Il pH finale del mezzo dovrebbe essere 7,4 ± 0,2. Il colore del terreno preparato è rosso-arancio, traslucido, senza precipitato.
Se si dispone di agar base xilosio lisina (XL), è possibile aggiungere sodio desossicolato, sodio tiosolfato e ferro ammonio citrato. In questo modo si ottiene la formula XLD agar.
applicazioni
L'agar XLD è utilizzato per il recupero di enteropatogeni, principalmente del genere Shigella e secondariamente del genere Salmonella. È utile per valutare campioni di feci, acqua e cibo.
Tipi di campioni
Feci
I campioni di feci possono essere seminati direttamente su XLD agar, facendo una buona distribuzione del materiale per ottenere colonie isolate.
Per migliorare il recupero della Salmonella, l'agar XLD può essere striato dai terreni di arricchimento per Salmonella.
Cibo
Nel caso degli alimenti si possono utilizzare brodi di arricchimento per Salmonella e Shigella. Per la Salmonella puoi usare il brodo di selenite cistina, brodo tetrationato verde brillante, tra gli altri.
Nel caso di Shigella può essere arricchito con brodo Shigella con 0,5 µ / ml di novobiocina, incubato a 42 ° ± 1 ° C per 16-20 ore.
acqua
Nell'analisi dell'acqua, si raccomanda, tra l'altro, la tecnica di filtrazione su membrana e l'uso di XLD agar.
Condizioni di impianto e identificazione
Il terreno seminato viene incubato in aerobiosi a 35 ° C per 24-48 ore.
Si osservano le colonie tipiche di ogni genere, le colonie sospette devono essere sottoposte a test biochimici per la loro identificazione.
QA
Per valutare il controllo di qualità del terreno, possono essere utilizzati i seguenti ceppi batterici: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella abony DSM 4224, Shigella flexneri ATCC 12022, Shigella sonnei ATCC 25931, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis 43071 , Klebsiella pneumoniae ATCC 33495.
Il genere Salmonella è caratterizzato dalla presenza di colonie rosse con un centro nero o colonie completamente nere su questo terreno. Mentre nel genere Shigella le colonie devono essere rosse, cioè il colore del terreno.
Nel caso di Escherichia coli, si prevede che sia totalmente o parzialmente inibito; se cresce le colonie sono gialle. Per Proteus mirabilis, si prevede una scarsa crescita con colonie rosa con o senza centro nero. Alla fine il genere Klebsiella crescerà come colonie gialle.
Pensieri finali
L'agar XLD è ampiamente utilizzato nei laboratori di batteriologia per la sua alta efficienza nel recupero della Shigella e ha anche un buon recupero del genere Salmonella.
Rall et al. (2005) nel loro lavoro intitolato "Valutazione di tre brodi di arricchimento e cinque terreni solidi per il rilevamento di Salmonella nel pollame" hanno dimostrato che dei 3 terreni classici testati (agar verde brillante, agar SS e agar XLD) , XLD agar ha avuto il miglior tasso di recupero.
Le percentuali di recupero erano le seguenti: 13,8% per agar verde brillante, 27,6% per SS e 34,5% per XLD. Agar Rambach con recupero del 48% e CHROMagar con 79,3% sono stati superati solo dai terreni cromogenici.
Riferimenti
- Malattie di origine alimentare. Shigellosi. Disponibile su: anmat.gov.ar
- "XLD agar." Wikipedia, l'enciclopedia libera. 9 febbraio 2019, 11:46 UTC. 10 aprile 2019, 19:25 wikipedia.org
- BBL Laboratories. CHROMagar Salmonella / BD XLD Agar (doppia piastra). 2013 Disponibile su: bd.com
- Lab. Neogen. Agar XLD. Disponibile su: foodsafety.neogen
- Francisco Soria Melguizo Laboratory. XLD Agar. Disponibile su: http://f-soria.es/Inform
- Rall L, Rall R, Aragon C, Silva M. Valutazione di tre brodi di arricchimento e cinque terreni di placcatura per il rilevamento di Salmonella nel pollame. Braz. J. Microbiol. 2005; 36 (2): 147-150. Disponibile su: scielo.br
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 ed. Editoriale Panamericana SA Argentina.