AGAR VERDE BRILLANTE: LOGICA, PREPARAZIONE E USI - BIOLOGIA - 2024

L' agar verde brillante è un terreno di coltura solido con un alto grado di selettività. Viene utilizzato esclusivamente per l'isolamento di ceppi del genere Salmonella, tuttavia esistono alcune eccezioni, come le specie typhi e paratyphi che non crescono su questo terreno.

La ricerca del genere Salmonella è frequente nei campioni di feci, acqua o cibo. In questo senso, questo mezzo può essere molto utile. Questo agar è stato creato nel 1925 da Kristensen, Lester e Jurgens, successivamente è stato modificato da Kauffmann.

Agar verde brillante. Colonie fermentanti e non fermentanti rispettivamente. Fonte: mostra MJ Richardson / Invisible Worlds - 2012geograph.org.uk/photo/2815842 Licenza Creative Commons.

E 'composto da pluripeptoni da digestione peptica di tessuto animale e digerito pancreatico di caseina, contiene inoltre estratto di lievito, cloruro di sodio, lattosio, saccarosio, rosso fenolo, verde brillante e agar-agar.

Si caratterizza per essere un ambiente piuttosto inospitale per la maggior parte dei batteri, favorendo la crescita della Salmonella, tuttavia alcuni coliformi sono in grado di sopravvivere in esso sviluppandosi debolmente.

È importante notare che il genere Shigella non cresce su questo terreno, né Salmonella typhimurium o Salmonella paratyphi. Pertanto, se si desidera isolare questi microrganismi, è necessario utilizzare altri terreni, come l'agar XLD, tra gli altri.

Base

Agar verde brillante

Ciascuno dei componenti che compongono il terreno svolge una funzione specifica che determina le caratteristiche e le proprietà dell'agar.

I pluripeptoni e l'estratto di lievito sono la fonte di nutrienti da cui i microrganismi traggono l'azoto ei minerali necessari al loro sviluppo. Il lattosio e il saccarosio sono fonti di energia per i microrganismi in grado di fermentarli.

Il verde brillante è la sostanza inibitoria che impedisce la crescita di batteri Gram positivi e un gran numero di microrganismi Gram negativi.

Il cloruro di sodio fornisce stabilità osmotica al terreno. Mentre il rosso fenolo è l'indicatore di pH, cambia colore quando rileva la produzione di acido dalla fermentazione dei carboidrati.

Su questo terreno crescono colonie non fermentanti di lattosio e saccarosio di colore bianco rosato o trasparente, su fondo rosso. Ad esempio, batteri del genere Salmonella.

Mentre i batteri fermentanti il ​​lattosio o il saccarosio in grado di crescere su questo terreno sviluppano colonie giallo-verdi o giallo-verdi su uno sfondo giallo-verdastro. Ad esempio, Escherichia coli e Klebsiella pneumoniae.

Varianti di agar verde brillante (BGA)

Esistono altre varianti di agar verde brillante; Novobiocin Brilliant Green Glucose (NBG) Agar e Novobiocin Brilliant Green Glycerol Lactose (NBGL) Agar.

Novobiocin Bright Green Glucose Agar

Contiene Trypticase Soy Agar, citrato ferrico di ammonio, sodio tiosolfato pentaidrato, rosso fenolo, glucosio, verde brillante, novobiocina e acqua distillata.

Viene utilizzato per l'isolamento delle colonie di Salmonella da campioni di feci.

In questo caso, il verde brillante e la novobiocina sono le sostanze inibitorie che impediscono la crescita dei batteri Gram positivi e di alcuni microrganismi Gram negativi.

Il tiosolfato di sodio è la fonte di solfuro e il citrato ferrico è la fonte di ferro, entrambi necessari per rivelare la produzione di idrogeno solforato attraverso la formazione di un precipitato di solfuro ferrico nero.

Il glucosio è il carboidrato fermentabile e il rosso fenolo è l'indicatore di pH.

Su questo terreno, le colonie di Salmonella si sviluppano grandi con un centro nero circondato da un alone rossastro e seguito da una chiara area visibile. Alcuni ceppi di Citrobacter freundii producono colonie identiche a quelle di Salmonella.

Novobiocin Brilliant Green Glycerol Lactose Agar (NBGL)

Questo terreno contiene tripticasi soia agar, citrato ferrico di ammonio, tiosolfato di sodio, lattosio, glicerolo, verde brillante, novobiocina e acqua distillata.

La differenza tra questo terreno e il precedente è che il glucosio viene sostituito dal lattosio e dal glicerolo e il rosso fenolo non viene utilizzato.

Il terreno viene utilizzato anche per isolare le specie di Salmonella, le colonie si sviluppano di colore nero, a causa della produzione di idrogeno solforato.

Solo le colonie che non producono acido dal glicerolo o dal lattosio raggiungono una produzione sufficiente di H ₂ S, perché il pH basso interferisce con la formazione di H ₂ S. Ciò si traduce in colonie incolori per la maggior parte delle specie di Proteus e Citrobacter.

Preparazione

-Pesare 58 grammi del terreno disidratato ottenuto in commercio. Aggiungilo a un litro di acqua ridistillata. Mescolare, lasciare riposare qualche minuto e porre il composto su una fonte di calore fino a completo scioglimento.

-Autoclave a 121 ° C per 15 minuti, non superare il tempo di sterilizzazione.

-Lasciate riposare e servite ben caldo in piastre Petri sterili. Il pH finale dovrebbe essere 6,9 ​​± 0,2.

-Lasciate solidificare e conservate in frigorifero fino al momento dell'uso. Prima di seminare i piatti dovrebbe prendere la temperatura ambiente.

-Il mezzo in polvere è di colore verde e preparato assume un colore arancio-marrone o rosso-verde, a seconda del pH e dell'azienda commerciale. Un colore molto marrone è indicativo che l'agar si è surriscaldato.

-Una volta che l'agar si è solidificato, non è consigliabile rifondere, poiché il terreno si deteriora.

Usi / applicazioni

Questo terreno viene utilizzato per cercare ceppi del genere Salmonella da campioni di feci e latticini, tra gli altri.

Essendo un ambiente piuttosto inospitale, è consigliabile seminare un abbondante inoculo se si utilizza il campione diretto. In caso contrario, è necessario eseguire un pre-arricchimento e un arricchimento dei campioni prima della semina in questo terreno.

Poiché alcuni ceppi di Salmonella sono inibiti o crescono con difficoltà, è consigliabile accompagnare questo terreno con altri agar selettivi per Salmonella.

Ogni colonia con una caratteristica tipica di Salmonella deve essere sottoposta a test biochimici per la sua identificazione definitiva.

QA

Per testare le buone prestazioni del terreno agar verde brillante, è possibile utilizzare i ceppi ATCC per osservarne lo sviluppo.

I ceppi più frequenti utilizzati per il controllo di qualità sono: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922, Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 6538.

I primi 3 dovrebbero dare colonie bianche rosate o trasparenti su fondo rosso. Salmonella con buon sviluppo e Proteus con crescita scarsa o regolare.

Per Klebsiella ed Escherichia sono previste colonie giallo-verdi con sfondo giallo e nel caso di Shigella e Staphylococcus dovrebbero essere inibite.

Il terreno disidratato deve essere conservato a temperatura ambiente, in un luogo asciutto, poiché il terreno è molto igroscopico.

Riferimenti

1. Laboratorio Difco Francisco Soria Melguizo SA Brilliant Green Agar. 2009
2. Britannia Laboratory. Agar verde brillante. 2015.
3. Laboratorio BD. BD Brilliant Green Agar. 2013.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosi microbiologica. (5a ed.). Argentina, Editoriale Panamericana SA
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 ed. Argentina. Editoriale Panamericana SA