L' agar solfito di bismuto è una coltura selettiva e differenziale di terreno solido, formulata appositamente per l'isolamento di Salmonella enterica sottospecie enterica sierotipo Typhi, tra le altre specie di Salmonella. Il terreno è noto come BSA agar per il suo acronimo in inglese Bismuth Sulfite Agar.
La formula originale per l'agar bismuto solfito è stata creata nel 1927 da Wilson e Blair (Glucose Bismuth Sulphite Iron Medium); conteneva solfito di sodio, glucosio, soluzione di bismuto, citrato di ammonio, solfato ferroso e agar-agar.
Crescita di 48 ore di incubazione di Salmonella sp su agar bismuto solfito. Fonte: Pixnio.com Autore: Dr. WR Erving, USCDCP
Oggi c'è una modifica del terreno originale, composto da estratto di carne, peptoni di carne e caseina, indicatore di solfito di bismuto, glucosio, fosfato disodico, solfato ferroso, verde brillante e agar-agar.
Esistono molti mezzi per l'isolamento delle specie Salmonella, ma quando si tratta di recuperare il sierotipo Typhi, l'agar solfito di bismuto ha un notevole vantaggio su di loro, poiché nella maggior parte dei casi si ottiene un recupero molto basso o nullo di questo microrganismo .
Tuttavia, è necessario utilizzare più di un tipo di terreno quando si cerca di isolare gli enteropatogeni, perché l'agar bismuto solfito è meno efficace per altre specie di Salmonella e per il genere Shigella, che sono inibite o si sviluppano molto male. in questo agar.
Va notato che di tutte le specie di Salmonella, il sierotipo Typhi è uno degli enteropatogeni più importanti nell'uomo, essendo questo il suo unico serbatoio. Questo sierotipo causa febbre tifoide, gastroenterite, batteriemia e setticemia.
Per questo motivo, è importante includere questo agar quando si analizzano campioni di acqua, feci o alimenti in cui si sospetta la sua presenza.
Base
Come la maggior parte dei terreni di coltura, Bismuth Sulfite Agar contiene sostanze nutritive per promuovere la crescita batterica, come i peptoni e l'estratto di carne. Allo stesso modo, il glucosio funziona come una fonte di energia e carbonio.
Tuttavia, non tutti i batteri cresceranno su questo terreno, poiché Bismuth Sulfite Agar è un terreno selettivo. Contiene composti che inibiscono la crescita di microrganismi Gram positivi e alcuni batteri Gram negativi. Questi composti sono: l'indicatore di bismuto solfito e verde brillante.
Da parte sua, il fosfato disodico mantiene l'osmolarità e il pH del mezzo.
Inoltre, l'agar bismuto solfito è un mezzo differenziale grazie alla presenza di solfato ferroso, che mostra la formazione di H 2 S. L'H 2 S formato dai batteri reagisce con il solfato ferroso e forma un precipitato nero insolubile chiaramente visibile.
Infine, l'agar-agar fornisce la consistenza solida al terreno.
Preparazione
Pesare 52,3 g di terreno disidratato e sciogliere in un litro d'acqua. Riscaldare la miscela a ebollizione per 1 minuto mescolando spesso, fino a completa dissoluzione. Non surriscaldare troppo. Questo terreno non è autoclavabile, perché il calore estremo danneggia il mezzo di coltura.
Lasciar raffreddare a 45 ° C e agitare prima di servire in piastre Petri sterili. Si consiglia di realizzare lastre di buon spessore. Per fare ciò, è necessario versare 25 ml in ogni piatto. Lasciate solidificare. Trattandosi di un terreno non sterilizzato, è normale che se ne consiglia l'uso immediato.
Tuttavia, uno studio condotto da D'aoust nel 1977, ha dimostrato che vi è un migliore recupero di Salmonella typhimurium e Salmonella enteritidis come agar bismuto solfito di medio età, non influenzando le prestazioni dei sierotipi Typhi e Paratyphi B.
D'aoust consiglia di utilizzare le piastre il 4 ° giorno di refrigerazione, sebbene avverta che con l'invecchiamento del mezzo, la selettività diminuisce e i ceppi di Proteus vulgaris si sviluppano più facilmente.
Per questo motivo, per campioni altamente contaminati, come le feci, è preferibile utilizzare terreno appena preparato. Altrimenti utilizzare il giorno 4 della sua preparazione. Altri autori consigliano di utilizzare le piastre il giorno successivo alla loro preparazione, conservate in frigorifero.
Le piastre refrigerate devono essere temperate prima dell'uso. Il pH del mezzo dovrebbe essere 7,5 ± 0,2. Il terreno grezzo è beige e il terreno preparato è opalescente grigio-verdastro.
applicazioni
Tra i campioni che possono essere piantati in questo terreno ci sono campioni di feci, acqua potabile o di scarico e cibo.
Per migliorare gli isolati si consiglia di effettuare un trattamento di pre-arricchimento con brodo di lattosio e dopo l'arricchimento con brodo tetrationato o brodo di selenite di cistina, prima della semina su agar solfito di bismuto.
Le piastre vengono incubate a 35 ° C ± 0,2 per 24-48 ore, in aerobiosi.
Caratteristiche delle colonie su agar bismuto solfito
Le colonie di Salmonella Typhi sono generalmente visibili su questo agar entro 24 ore con un centro nero e circondate da un alone verde brillante. Mentre in 48 ore diventano completamente nere per la formazione di idrogeno solforato.
-Questo terreno inibisce la maggior parte delle specie del genere Shigella.
- S. Typhi e S. arizonae possono dare colonie molto simili.
-I coliformi che producono H 2 S come Proteus e Citrobacter producono colonie simili a quelle di Salmonella, quindi è necessario effettuare test di identificazione biochimica.
-È necessario eseguire una buona striatura per ottenere colonie isolate; È l'unico modo per osservare le caratteristiche tipiche delle colonie del genere Salmonella.
QA
Per il controllo della sterilità, una piastra non inoculata viene incubata a 37 ° C, si prevede che non ci sarà crescita o cambiamento di colore.
Per il controllo di qualità, ceppi noti come:
Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella Typhi ATCC 19430, Shigella flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Escherichia coli e Shigella flexneri dovrebbero essere parzialmente inibiti sviluppando rispettivamente colonie bruno-verdastre e brune. Entrambe le salmonelle, invece, devono avere un ottimo sviluppo con colonie nere con lucentezza metallica, ed infine Enterococcus faecalis deve essere totalmente inibito.
Riferimenti
- Wilson, W. e EM McV. Blair. Uso di un terreno di ferro glucosio bismuto solfito per l'isolamento di B. typhosus e B. proteus. The Journal of Hygiene, 1927; 26 (4), 374-391. Estratto da .jstor.org
- D'aoust JY. Effetto delle condizioni di conservazione delle prestazioni dell'agar solfito di bismuto. J Clin Microbiol. 1977; 5 (2): 122–124. Disponibile in: ncbi.nlm.nih.gov
- Laboratori IVD. Agar bismuto-solfito secondo WILSON-BLAIR. Disponibile su: BismuthSulfitagar_span_Jan_2009% 20 (2) .pdf
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