TRYPTICASEIN SOY AGAR: RAZIONALE, PREPARAZIONE E USI - BIOLOGIA - 2024

Il triptone di soia agar o Trypticase Soy Agar è un terreno di coltura solido e non selettivo dal punto di vista nutrizionale. È designato dalle lettere TSA per il suo acronimo in inglese Trypticase Soy Agar. È composto da triptein, peptone di soia, cloruro di sodio e agar-agar.

Per il suo alto potere nutritivo è ideale per la coltivazione di microrganismi moderatamente esigenti e non esigenti. Il terreno senza supplementi aggiuntivi non è raccomandato per colture primarie, ma è molto utile per subcolturare ceppi puri e mantenerli vitali, tra gli altri usi.

Trypticasein soia agar cunei in provette con tappi in bachelite. Fonte: fotografia scattata dall'autore MSc. Marielsa Gil.

Inoltre, questo agar serve come base per la preparazione di terreni arricchiti come l'agar sangue, specialmente quando è necessario osservare i pattern di emolisi e montare i taxa di optochina e bacitracina, richiesti nella diagnosi rispettivamente di Streptococcus pneumoniae e Streptococcus pyogenes.

D'altra parte, quando combinato con antibiotici è utile isolare microrganismi anaerobici facoltativi e stretti clinicamente importanti da campioni con flora mista.

Infine, la composizione della tripticaseina soia agar e le sue prestazioni soddisfano i requisiti stabiliti dalle diverse farmacopee (europea, giapponese e nordamericana).

Base

Per il corretto sviluppo dei batteri è necessaria la presenza di apporti energetici, quali aminoacidi, vitamine, basi puriche e pirimidiche.

In questo senso, il triptein e il peptone di soia forniscono questi nutrienti ai microrganismi, permettendo così il loro pieno sviluppo. Tuttavia, per i batteri esigenti è necessario integrare questo agar con sangue defibrinato o sangue riscaldato per aumentarne l'arricchimento.

D'altra parte, se si aggiungono antibiotici al terreno, diventa un terreno selettivo. Si può aggiungere anche lo 0,6% di estratto di lievito per favorire l'isolamento di specie del genere Listeria, mentre l'aggiunta di cistina tellurite e sangue di agnello è ideale per Corynebacterium diphteriae.

Infine, il cloruro di sodio fornisce l'equilibrio osmotico al terreno e l'agar fornisce la consistenza solida.

Preparazione

Piastre di Trypticasein Soy Agar

Per preparare la trypticasein soy agar, pesare su una bilancia digitale 40 g del terreno commerciale disidratato. Si scioglie in un litro di acqua distillata contenuta in un pallone.

Si lascia riposare per 5 minuti e poi si porta su una fonte di calore per sciogliere il terreno. Dovrebbe essere mescolato frequentemente e fatto bollire per 1 o 2 minuti. Successivamente, il terreno viene sterilizzato in autoclave a 121 ° C per 15 minuti.

Lasciar raffreddare a 50 ° C e distribuire in piastre Petri sterili. Lasciar solidificare, capovolgere, ordinare in plaqueros e conservare in frigorifero.

Il pH finale del mezzo dovrebbe essere 7,3 ± 0,2.

Va notato che il colore del terreno di coltura disidratato è beige chiaro e deve essere conservato tra 10 e 35 ° C, in un luogo asciutto.

Da parte sua, l'agar preparato è di colore ambra chiaro. I piatti preparati devono essere conservati in frigorifero (2-8 ° C) fino al momento dell'uso.

Le piastre devono raggiungere la temperatura ambiente prima dell'uso.

Piastre di agar di soia tripticaseina integrate con sangue

L'agar sangue viene preparato aggiungendo il 5% di sangue defibrinato al momento del raffreddamento dell'agar di soia tripticaseina a 50 ° C. La miscela viene omogeneizzata ruotando con movimenti delicati.

Servire in piastre Petri sterili. Il colore centrale dovrebbe essere rosso ciliegia.

Piastre di agar di soia tripticaseina integrate con sangue riscaldato

Per preparare l'agar sangue a base di TSA, procedere come le procedure già descritte, ma quando si lascia l'autoclave si lascia riposare fino a quando la temperatura del terreno è approssimativamente compresa tra 56 e 70 ° C. A quel punto il sangue viene posto e mescolato fino a quando il terreno diventa marrone.

Servire in piastre Petri sterili. Il colore del mezzo è marrone cioccolato.

Trypticasein Soy Agar Wedges

La procedura di preparazione dell'agar è la stessa descritta per le piastre, con la differenza che invece di servire il terreno su piastre Petri, viene distribuito tra 10 e 12 ml in provette con coperchio in bachelite prima della sterilizzazione.

Successivamente, le provette vengono autoclavate a 121 ° C per 15 minuti. Quando se ne vanno, vengono inclinati con l'aiuto di un supporto e lasciati solidificare.

I cunei preparati vengono seminati per superficie e servono a mantenere vitali alcuni microrganismi non esigenti per un periodo di tempo specificato.

applicazioni

Trypticasein Soy Agar viene utilizzato nei seguenti casi:

-Come base per preparare il classico agar sangue che viene utilizzato abitualmente nella maggior parte dei laboratori.

-L'isolamento di batteri esigenti.

-Osservazione del pattern di emolisi.

-Esecuzione di test diagnostici.

-Come base per preparare uno speciale agar sangue per Corynebacterium diphteriae, con tellurite di cistina e sangue di agnello.

-Come base per preparare agar sangue di agnello, più kanamicina-vancomicina per la crescita di anaerobi, in particolare Bacteroides sp.

- Per il mantenimento di ceppi non esigenti (Bacterioteca).

- Conta microbica aerobica nello studio del limite microbico di campioni di acqua, ambiente, alimenti e cosmetici.

Sown

I campioni possono essere seminati direttamente sulla superficie di Trypticasein Soy Agar integrato con sangue o altri additivi. Viene seminato per esaurimento.

Considerando che, piastre di agar di soia tripticaseina senza additivi sono generalmente utilizzate per subcolturare ceppi microbici (batteri o lievito).

QA

Controllo della sterilità

Per verificare la sterilità dei diversi terreni preparati con trypticasein soy base agar, si raccomanda quanto segue: da ciascun lotto preparato, 1 o 2 piastre o provette non inoculate devono essere incubate a 37 ° C per 24 ore per dimostrarne la sterilità. In tutti i casi deve rimanere senza crescita.

Se viene rilevata una contaminazione, l'intero lotto deve essere scartato.

Controllo della crescita

I seguenti ceppi batterici possono essere utilizzati per studiare il corretto funzionamento di trypticasein soy agar: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 e Enterococcus faecalis ATCC 29212.

I ceppi vengono seminati e incubati in aerobiosi a 37 ° C per 24 ore.

In tutti i casi la crescita deve essere soddisfacente.

Possono essere utilizzati anche funghi come Candida albicans Complex ATCC 10231 e Aspergillus niger ATCC 16404. Si prevede una buona crescita per entrambi i ceppi.

Controllo della crescita e pattern di emolisi di trypticasein soy agar integrato con sangue

Per verificare il corretto funzionamento dell'agar sangue preparato con questa base, è possibile utilizzare i seguenti ceppi: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 e Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.

Vengono seminate e incubate a 37 ° C in microaerofilia per 24 ore.

In tutti i casi, la crescita dovrebbe essere soddisfacente, tenendo conto che la beta-emolisi (alone leggero attorno alla colonia) dovrebbe essere osservata in S. pyogenes e che dovrebbe essere osservata l'emolisi alfa (alone verdastro attorno alla colonia) in entrambi i ceppi di S. pneumoniae. colonie).

Riferimenti

1. Collaboratori di Wikipedia. Trypticase I am agar. Wikipedia, l'enciclopedia libera. 17 dicembre 2018, 15:47 UTC. Disponibile su: https://en.wikipedia.org
2. Britannia Laboratories. Agar di soia triptein. 2015 Disponibile su: britanialab.com
3. Neogen Laboratories. Tryptic soia agar. Disponibile su: foodsafety.neogen.com
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 ed. Argentina. Editoriale Panamericana SA
5. BD Laboratories. Trypticase I am Agar. Disponibile su: .bd.com