L' agar Salmonella Shigella noto anche come SS agar è un terreno selettivo e differenziale moderatamente, appositamente progettato per l'isolamento di batteri enteropatogeni dei generi Salmonella e Shigella, entrambi campioni ambientali come quelli clinici.
L'agar SS ha una composizione complessa; È composto da estratto di carne, peptone, lattosio, sali biliari, citrato di sodio, tiosolfato di sodio, citrato ferrico, agar, rosso neutro, verde brillante e acqua distillata. Data la sua grande selettività si possono seminare campioni con abbondante flora mista.
Agar SS con colonie di Salmonella sp. Fonte: Manurx27, da Wikimedia Commons
Nei laboratori di microbiologia, il terreno Salmonella-Shigella è ampiamente utilizzato per indagare la presenza di Salmonella e Shigella in campioni di feci diarroiche, acque reflue, acqua potabile e cibo.
A volte è necessario utilizzare brodo di pre-arricchimento (brodo di lattosio) e brodo di arricchimento (brodo di cistina di selenite) per recuperare i ceppi di Salmonella.
Questi passaggi sono necessari quando si sospetta l'esistenza di Salmonella in quantità molto basse, o dove il ceppo può essere abusato da processi tipici della produzione industriale, principalmente alimenti trasformati. Si consiglia inoltre di arricchire i campioni di feci di pazienti che sono stati trattati con antibiotici.
Successivamente, il brodo arricchito può essere seminato su agar Salmonella-Shigella e altri terreni simili, come agar xilosio, lisina desossicolato (XLD) e agar enterico Hektoen (HE).
Base
Ogni componente del terreno di coltura Salmonella-Shigella ha una funzione specifica e la miscela nel suo insieme gli conferisce le proprietà che lo caratterizzano.
Potere nutriente
L'estratto di carne e il peptone (digerito con caseina e tessuto animale) forniscono i nutrienti necessari (nitrogeni, carbonio e vitamine) per lo sviluppo di microrganismi in grado di tollerare il resto dei componenti.
Consistenza
L'agar-agar è responsabile di fornire la consistenza solida al terreno.
Selettivo
Questo terreno è altamente selettivo perché contiene sali biliari, citrato di sodio e verde brillante. Pertanto, inibisce la crescita di tutti i batteri Gram positivi e della maggior parte dei bacilli Gram negativi, inclusi alcuni coliformi.
Mentre i batteri del genere Salmonella e alcuni ceppi di Shigella supportano questi composti.
Principalmente, il genere Salmonella è molto resistente ai sali biliari, tanto da essere in grado di vivere nella cistifellea di alcuni pazienti portatori che perdono costantemente i batteri nelle feci.
Differenziale
Il lattosio è il carboidrato fermentabile che aiuta a differenziare i ceppi fermentanti il lattosio da quelli non fermentanti. Questa proprietà è evidenziata dalla presenza dell'indicatore di pH, che in questo terreno è rosso fenolo.
I ceppi fermentanti il lattosio danno colonie rosse, mentre i ceppi non fermentanti sono incolori. Questa caratteristica è importante, poiché Salmonella e Shigella non fermentano il lattosio.
D'altra parte, questo terreno contiene tiosolfato di sodio come fonte di solfuro e citrato ferrico come fonte di ferro. Entrambi i composti sono in grado di differenziare i batteri in grado di produrre acido solfidrico. Questi reagiscono per formare un precipitato di solfuro ferrico nero visibile, insolubile.
Questa proprietà si trova in alcuni ceppi del genere Salmonella. Normalmente le loro colonie sono piatte e incolori con un punto nero al centro. Il resto delle Salmonelle non produce H 2 S e si sviluppa come colonie incolori.
D'altra parte, le colonie del genere Shigella sono piatte incolori senza annerimenti.
Preparazione
Questo mezzo è molto semplice da preparare.
Pesare 63 g del terreno commerciale disidratato e sciogliere in un litro di acqua distillata. Riscalda la soluzione e mescola. La miscela può bollire fino a pochi minuti.
Questo mezzo non deve essere autoclavato. Dopo averlo sciolto va servito direttamente su piatti sterili singoli o doppi.
Quando si solidificano, vengono disposte capovolte sulle piastrine e conservate in frigorifero (2-8 ° C) fino al momento dell'uso.
Il terreno dopo la preparazione deve rimanere a pH 7,2 ± 0,2 e con un colore rosso-arancio.
È importante lasciare che le piastre si riscaldino prima di seminare i campioni. Il campione originale può essere seminato direttamente, scaricando il materiale su una parte dell'agar e quindi strisciando da lì.
In caso di utilizzo di brodi arricchiti, passare una porzione del brodo di selenite e seminare con una spatola drigalski.
Incubare a 37 ° C per 24 ore in aerobiosi.
Tieni presente che il numero di grammi da pesare e il pH finale del mezzo possono variare da una casa commerciale all'altra. La base centrale porta sempre le indicazioni per la sua preparazione.
Uso
Viene spesso utilizzato nell'analisi della coltura delle feci e nello studio microbiologico di acque reflue, acqua potabile e campioni di cibo.
Spesso si preparano doppie piastre, da un lato si posiziona l'agar Salmonella-Shigella e dall'altro si posiziona l'agar XLD.
limitazioni
-Alcuni ceppi di Shigella non crescono in questo terreno. Pertanto, non è raccomandato per l'isolamento primario di questo genere.
-Non ogni colonia trasparente con un centro nero è indicativa di Salmonella; Per una corretta identificazione devono essere effettuati test biochimici, poiché le colonie di alcuni ceppi di Proteus sono indistinguibili da quelle di Salmonella.
-Il terreno disidratato deve curare l'esposizione all'ambiente, poiché è molto igroscopico. Pertanto, deve essere conservato in un ambiente asciutto e ben chiuso. Aperto per brevissimi periodi.
-Con il passare del tempo i sali biliari nel terreno possono precipitare, formando un'immagine simile a un tappetino all'interno dell'agar, ma ciò non influisce sui risultati.
-Alcuni ceppi di Shigella possono fermentare lentamente il lattosio.
QA
Per dimostrare che il terreno funziona correttamente, si consiglia di piantare ceppi di controllo noti o certificati e osservare se la crescita soddisfa le caratteristiche previste.
Per questo, possono essere utilizzati ceppi di E. coli, Enterobacter sp, Klebsiella pneumoniae, Shigella flexneri, Salmonella typhimurium o Enterococcus faecalis.
I risultati attesi sono:
Enterobacter e Klebsiella ------ grandi colonie e mucoidi rossi o rosa.
Shigella flexneri ---------- colonie piatte trasparenti o incolori.
Salmonella typhimurium ------ colonie incolori con centri neri.
Enterococcus faecalis -------- inibizione totale.
Riferimenti
- Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Agar Salmonella-Shigella. Disponibile su: f-soria.es
- Laboratorio BD. BD Salmonella-Shigella Agar. 2013, disponibile su: bd.com
- Britannia Laboratories. Salmonella-Shigella Agar. 2015 Disponibile su: britanialab.com
- Diagnostica Valtek. Salmonella-Shigella Agar (SS Agar). 2010. Disponibile su: andinamedica.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 ed. Editoriale Panamericana SA Argentina.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosi microbiologica. 5a ed. Editoriale Panamericana SA Argentina.