L' agar sale di mannitolo o sale di manitolo è una coltura selettiva e differenziale di terreno solido. È stato creato da Chapman per l'isolamento di cocchi Gram-positivi patogeni, in particolare Staphylococcus aureus.
Tuttavia, è anche utile isolare lo Staphylococus epidermidis, che a volte può essere presente come patogeno opportunista, e lo Staphylococcus saprophyticus, un patogeno urinario riconosciuto, tra le altre specie.
A. Fiola con terreno agar mannitolo salato preparato. B. Piastre di agar mannitolo salate seminate con ceppi batterici di mannitolo fermentanti e non fermentanti. Fonte: A e B: foto scattate dall'autore MSc. Marielsa Gil.
Alcuni Enterococcus sono in grado di crescere su questo terreno, così come certi bastoncini sporigeni Gram-positivi.
Questo terreno è molto utile nell'analisi di campioni clinici, ma è anche utilizzato nello studio microbiologico degli alimenti e nel controllo di qualità di prodotti industriali, come cosmetici, medicinali, tra gli altri.
Salty Mannitol Agar è composto da estratti e peptoni di carne di manzo, triptein, mannitolo, cloruro di sodio, rosso fenolo e agar.
Base
L'agar mannitolo è selettivo grazie alla sua alta concentrazione di sale. La salinità agisce come una sostanza inibitoria e previene la crescita dei batteri Gram negativi.
È anche differenziale a causa della presenza del mannitolo carboidrato e dell'indicatore di pH rosso fenolo. Da questo, i batteri in grado di fermentare il mannitolo producono acidi, acidificando il terreno, ingiallendo le colonie e il terreno.
D'altra parte, le colonie che non fermentano il mannitolo crescono nel terreno assumendo i nutrienti forniti dagli estratti e dai peptoni di carne e triptein. Da lì i batteri estraggono il carbonio, l'azoto, le vitamine ei minerali necessari alla loro crescita.
Le colonie in questo caso possono essere rosa deboli o forti e il terreno rimane dello stesso colore o cambia in fucsia.
L'agar è la sostanza che fornisce la consistenza al terreno.
Preparazione
Per preparare un litro di mannitolo agar salato, si pesano 111 g del terreno disidratato della società commerciale preferita e si sciolgono in 1000 ml di acqua distillata, utilizzando un pallone.
Il calore viene applicato con frequenti agitazioni del mezzo per migliorare il processo di dissoluzione. Bollire per un minuto.
Il pallone viene posto in autoclave a 121 ° C per 15 minuti.
Al termine del tempo, rimuovere la fiala dall'autoclave, lasciarla riposare e servire tra 15 e 20 ml su piastre Petri sterili quando la temperatura è di circa 50-55 ° C.
Si lascia solidificare ordinando capovolto in plaqueros e conservando in frigorifero fino al momento dell'uso. Prima di seminare un campione, attendere che la piastra raggiunga la temperatura ambiente.
Le piastre vengono seminate mediante striatura o semina in superficie con una spatola drigalski. Il pH finale del terreno preparato deve essere 7,4 ± 0,2
Il colore del terreno disidratato è beige chiaro e il colore del terreno preparato è rosso arancio.
applicazioni
Per la sua elevata selettività, questo terreno è ideale per la semina di campioni con flora mista in cui si ricerca la presenza di Staphylococus aureus, principale patogeno di questo genere.
In questo senso, uno dei suoi usi più frequenti è nell'analisi microbiologica di essudati faringei e campioni di secrezioni nasali, soprattutto per rilevare portatori asintomatici di S. aureus.
Alcuni paesi hanno implementato questa analisi come requisito obbligatorio per le persone che vogliono lavorare come venditori di cibo.
Questo controllo previene la contrazione delle persone portatrici di S. aureus, evitando così ingenti intossicazioni alimentari, dovute al consumo di alimenti contaminati da enterotossina stafilococcica.
Può anche essere incluso nella semina di infezioni di ferite, emocolture, CSF, lavaggio broncoalveolare, tra gli altri.
L'agar salato al mannitolo è utile per isolare nuovamente le colonie da colture di urina da agar CLED o agar sangue il cui Gram ha rivelato cocchi Gram-positivi in cluster.
È valido anche nell'analisi microbiologica di alimenti, acqua potabile, suolo, tra le altre applicazioni.
QA
Una volta preparato un lotto di piastre con agar mannitolo salato, si consiglia di eseguire un controllo di qualità. I ceppi di controllo vengono seminati per mostrare se c'è crescita o meno.
I ceppi noti di Staphylococcus aureus possono essere utilizzati come controllo positivo. Dovrebbe crescere in modo soddisfacente sviluppando colonie gialle e anche il terreno diventa dello stesso colore.
Allo stesso modo, è conveniente includere un ceppo noto di Staphylococcus epidermidis. Dovrebbe crescere in modo soddisfacente sviluppando colonie rosa e il terreno rimane dello stesso colore o si scurisce fino a diventare un rosa più intenso.
Come controllo negativo, vengono utilizzati ceppi che non dovrebbero crescere su questo terreno. Ad esempio, è possibile coltivare un ceppo noto di Escherichia coli o Klebsiella pneumoniae. Il risultato atteso è una completa inibizione, cioè nessuna crescita.
Inoltre, è necessario incubare una piastra non inoculata. In esso non dovrebbe esserci crescita o cambiamento di colore.
È importante che la piastra non venga utilizzata se sono presenti segni di deterioramento, come contaminazione, disidratazione, scolorimento, tra gli altri.
Pensieri finali
Quando si utilizza un mezzo agar salato al mannitolo, ci sono alcuni aspetti importanti da considerare:
- Ottenere una crescita di colonie gialle non indica che si tratti di Staphylococcus aureus. Va ricordato che alcuni ceppi di Enterococcus sono in grado di crescere in questo terreno e di fermentare il mannitolo, così come certi bastoncelli Gram positivi sporigeni.
Pertanto, è importante eseguire un grammo sulla colonia e un test per la catalasi.
-D'altra parte, si deve considerare che anche altre specie di Staphylococcus diverse dall'aureus sono in grado di fermentare il mannitolo. Pertanto, è importante sottoporre la colonia a un brodo nutriente da prelevare da lì ed eseguire il test della coagulasi.
Tra le specie di Staphylococcus di importanza clinica per l'uomo che fermentano il mannitolo vi sono: S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum, tra gli altri.
Altri possono dare una reazione variabile, cioè, a volte positiva e talvolta negativa. Alcuni sono S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S. intermedius, tra gli altri.
-Non è consigliabile prelevare colonie direttamente dall'agar mannitolo per eseguire il test della coagulasi, poiché l'alta concentrazione di sale nel terreno può interferire con il risultato.
-Infine, si consiglia di incubare le piastre seminate con mannitolo salato fino a 48 ore, poiché alcuni ceppi di S. aureus possono fermentare lentamente il mannitolo, anche se questo non è molto frequente.
Riferimenti
- Britannia Laboratories. Agar salato al mannitolo. 2015 Disponibile su: britanialab.com
- "Agar salato al mannitolo". Wikipedia, l'enciclopedia libera. 31 ottobre 2018, 19:08 UTC. 17 gennaio 2019, 20:55, disponibile su: es.wikipedia.org.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosi microbiologica. (5a ed.). Argentina, Editoriale Panamericana SA
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 ed. Argentina. Editoriale Panamericana SA
- BD Laboratories. BD Mannitol Salt Agar. 2013, disponibile su: bd.com.