- Base
- Composizione
- Preparazione
- applicazioni
- Come base per la preparazione dell'agar sangue
- Stimola la sporulazione dei batteri sporigeni
- Manutenzione del ceppo
- Conteggio delle colonie
- Esecuzione di test diagnostici
- Recupero di aerobi mesofili da acque salate ricreative (Spiagge)
- Riferimenti
L' agar nutriente è un terreno non selettivo e nessuna coltura solida differenziale. In questo terreno crescono tutti i tipi di batteri non esigenti dal punto di vista nutrizionale.
È un terreno semplice e, nonostante il nome, contiene un valore nutritivo inferiore rispetto ad altri terreni simili, come Brain Heart Infusion Agar o Trypticase Soy Agar.
Le colonie contano sull'agar nutriente
La sua utilità in laboratorio è molto varia. Viene utilizzato principalmente per la subcoltura delle specie, il mantenimento dei ceppi, il conteggio delle colonie, come base per la preparazione dell'agar sangue, tra gli altri.
Allo stesso modo, per il suo colore beige chiaro, si distingue eccezionalmente la produzione di pigmenti generati da alcuni ceppi batterici, come il pigmento verdastro di Pseudomonas aeruginosa, il pigmento rosso mattone prodotto da Serratia marcescens a temperatura ambiente, il pigmento giallo dorato di Staphylococcus aureus, tra gli altri.
Inoltre, è uno dei substrati di coltivazione più economici trovati sul mercato.
Base
Come già accennato in precedenza, è un mezzo molto semplice che si basa sul fornire nutrienti per la crescita batterica senza restrizioni e senza reazioni complesse da interpretare.
Poiché il terreno è traslucido, è ideale per contare le colonie con il metodo di semina in profondità.
Composizione
È composto principalmente da estratto di carne o estratto di lievito, peptoni o digestato pancreatico di gelatina, agar-agar, cloruro di sodio e acqua distillata.
L'estratto di carne o lievito e i peptoni rappresentano le fonti essenziali di carbonio e minerali (azoto, fosforo e zolfo), che saranno utilizzati dai batteri come fonte di energia e fattori di crescita.
Allo stesso modo, l'agar-agar è la base di tutti i terreni di coltura solidi, venendo a sostituire la gelatina, che è stata il primo composto di base utilizzato da Robert Koch per dare consistenza solida ai suoi terreni.
L'agar è un polisaccaride composto da galattosio, galattomannano, agarosio e agaropectina. Imposta a 40 ° C e fonde vicino a 100 ° C.
Da parte sua, il cloruro di sodio fornisce al terreno l'osmolarità necessaria per lo sviluppo batterico.
Infine l'acqua serve per idratare e sciogliere i composti liofilizzati. Utilizzare acqua distillata regolata a pH neutro. L'acqua del rubinetto non deve essere utilizzata perché contiene calcio e magnesio che possono reagire con i fosfati nel mezzo e formare sali insolubili.
Preparazione
Per un litro di agar nutriente, pesare 31 g di terreno disidratato. Mettetela in una fiaschetta e scioglietela in un litro di acqua distillata. Dopo 5 minuti di riposo, riscaldare su una fonte di calore e mescolare costantemente fino all'ebollizione per 1 o 2 minuti.
Preparazione del terreno di coltura.
Il pallone viene quindi posto in autoclave e sterilizzato a 121 ° C per 20 minuti.
Sterilizzazione in autoclave
Alla fine del tempo viene tolto dall'autoclave e servito in piastre Petri sterili, utilizzando una cappa a flusso laminare o il becco Bunsen.
Se le piastre Petri sono usa e getta (plastica), il terreno deve essere distribuito quando l'agar ha una temperatura di circa 50 ° C, per evitare che si deformino a causa del calore eccessivo.
Lasciar solidificare e conservare su un portapiatti capovolto e conservare in frigorifero a 2-8 ° C fino al momento dell'uso.
Le piastre devono essere temperate prima di essere seminate. Le piastre di agar nutritivo non devono essere utilizzate se sono contaminate o disidratate.
Il pH del terreno preparato deve essere regolato a 7,3 ± 0,2.
applicazioni
È il mezzo di coltura più semplice utilizzato nel laboratorio di microbiologia. La sua formulazione è ottima per la crescita di batteri non esigenti.
I suoi principali utilizzi sono spiegati di seguito:
Come base per la preparazione dell'agar sangue
Questo terreno viene talvolta utilizzato come base per preparare l'agar sangue, tuttavia non è la base più comunemente utilizzata.
Stimola la sporulazione dei batteri sporigeni
Questo terreno di coltura è particolarmente utile per stimolare la sporulazione di batteri sporigeni come Bacillus sp.
Per questo, un ceppo del genere Bacillus viene seminato e incubato per 24 ore a 37 ° C in aerobiosi. Una volta che le colonie sono cresciute, la piastra viene sottoposta a stress termico, cioè la temperatura del forno viene portata a 44 ° C e lasciata per ulteriori 24 ore o posta in frigorifero per 24 ore.
Alla fine del tempo, vengono realizzati strisci di coltura e colorati con colorante Gram o con colorante per spore di Shaeffer-Fulton. In essi saranno osservati bacilli con endospore (spore all'interno del bacillo) ed esospore (spore all'esterno del bacillo).
Manutenzione del ceppo
Alcuni laboratori di supporto alla ricerca o alla didattica universitaria richiedono il mantenimento di batteri vitali di importanza clinica il più a lungo possibile, al fine di utilizzare la banca dei batteri (batterioteca) per lavori di ricerca o per la preparazione di pratiche didattiche, dove il Gli studenti impareranno a manipolare e identificare questi microrganismi.
A questo scopo si possono utilizzare agar nutrienti e agar per infusione cervello-cuore. L'agar viene preparato, versato in provette con coperchio in bachelite e inclinato su una base, in modo tale che l'agar si solidifichi formando un blocco sul fondo e una smussatura sulla superficie (becco di flauto).
Ogni provetta è etichettata con il nome dei batteri da seminare e la data. Ciascuno dei batteri sarà seminato sulla smussatura e incubato per 24 ore Una volta che le colonie sono cresciute, le provette vengono conservate a temperatura ambiente.
La batterioteca deve essere rinnovata da 1 a 3 mesi, per evitare la contaminazione e la disidratazione del terreno e la morte dei batteri.
Solo i batteri non schizzinosi possono essere mantenuti in questo modo.
Conteggio delle colonie
Sebbene esistano mezzi specializzati per il conteggio delle colonie, come l'agar di conteggio standard, l'agar nutriente può essere utilizzato a questo scopo, mediante semina in superficie con una spatola drigalski o in profondità. Per questo è molto utile nell'analisi microbiologica di alimenti e acqua.
Esecuzione di test diagnostici
Poiché è un terreno che non contiene sangue o altri additivi, è ideale per l'assunzione di colonie coltivate su questo terreno per eseguire il test della catalasi.
Allo stesso modo, per il suo colore chiaro, è indicato per eseguire test ossidasi direttamente su un'area dell'agar seminata, senza interferenze.
Recupero di aerobi mesofili da acque salate ricreative (Spiagge)
L'agar nutriente preparato con il 10% di acqua di mare è utile per la valutazione degli aerobi mesofili nelle acque della spiaggia.
In questo modo si può apprezzare il reale livello di contaminazione che le acque hanno con questi microrganismi, poiché in questo tipo di campioni i risultati si sovrappongono quando si utilizzano terreni di coltura preparati in modo convenzionale.
Ciò è stato dimostrato da Cortez et al. nel 2013 in un lavoro di ricerca.
Questo può essere spiegato a causa del brusco cambiamento che subiscono i batteri quando passano da un ambiente ipersalato a un ambiente a bassa salinità, quindi i microrganismi entrano in uno stato di letargia in cui sono vitali, ma non coltivabili.
Riferimenti
- "Agar nutritivo". Wikipedia, l'enciclopedia libera. 13 settembre 2016, 20:33 UTC. 29 dicembre 2018, 21:04 en.wikipedia.org
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- Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Effetto dei terreni di coltura preparati con acqua di mare sugli indicatori di salute nelle acque marine delle terme di Chichiriviche, stato di Falcón, Venezuela. Rev Soc Ven Microbiol 2013; 33: 122-128
- Paredes V, Dias V, Silva de Almeida M e Cardoso M. Qualità microbiologica dell'acqua per le dosi di inseminazione, per i suini. Cient.Agro.Amaz. 2013; 1 (2): 42-49.
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