- Base
- Agar MacConkey
- Sali biliari e violetto cristallino
- Peptoni, polipectoni e lattosio
- Indicatore di pH
- Acqua distillata, cloruro di sodio e agar
- Preparazione
- Usi dell'agar MacConkey convenzionale
- Altre varianti dell'agar MacConkey
- Agar MacConkey con sorbitolo
- Agar MacConkey senza violetto cristallino, né sale
- Agar MacConkey con cefoperazone
- Agar MacConkey preparato con acqua di mare al 10% v / v
- Riferimenti
L' agar MacConkey è un terreno solido che consente l'isolamento esclusivo dei batteri Gram negativi. Per questo motivo, è un terreno selettivo e consente anche di distinguere tra bacilli fermentanti e non fermentanti, il che lo rende un terreno differenziale. È uno dei terreni di coltura più utilizzati in un laboratorio di microbiologia.
Questo terreno è utilizzato principalmente per l'isolamento di bacilli Gram negativi appartenenti alla famiglia delle Enterobacteriaceae, comprese le specie opportunistiche ed enteropatogene.
Agar MacConkey seminato con due tipi di batteri. Colonie fermentanti il lattosio sul lato sinistro, colonie non fermentanti il lattosio sul lato destro.
Può anche essere utilizzato per isolare altri bacilli enterici che vivono nel tratto gastrointestinale, ma non appartengono a Enterobacteriaceae, come Aeromonas sp, Plesiomonas sp, tra gli altri.
Infine, può isolare altri bacilli Gram-negativi non fermentanti il glucosio che si trovano nell'ambiente, nell'acqua o nel suolo, ma che a volte possono essere patogeni opportunistici come Pseudomonas sp, Acinetobacter sp, Alcaligenes sp, Chromobacterium violaceum, Stenotrophomonas maltophilia, tra gli altri.
Base
Agar MacConkey
Il fondamento di questo mezzo può essere spiegato attraverso la descrizione dei suoi componenti, poiché ognuno ha uno scopo che ne determina una proprietà.
Sali biliari e violetto cristallino
In questo senso, l'agar MacConkey ha una composizione complessa. Innanzitutto contiene sali biliari e violetto cristallino.
Questi elementi sono responsabili dell'inibizione della crescita dei batteri Gram positivi e di alcuni esigenti bacilli Gram negativi. A sua volta, favorisce lo sviluppo di bacilli Gram negativi che non sono influenzati da queste sostanze. Pertanto è un terreno selettivo.
Si dice che sia leggermente selettivo rispetto ad altri terreni che inibiscono anche la crescita dei batteri Gram positivi e anche della maggior parte dei batteri Gram negativi.
Peptoni, polipectoni e lattosio
Contiene sostanze che forniscono i nutrienti necessari ai microrganismi che si sviluppano in questo ambiente, come peptoni, polipectoni e lattosio.
Il lattosio è il punto chiave affinché il terreno sia un terreno differenziale, poiché i microrganismi che hanno la capacità di fermentare il lattosio svilupperanno forti colonie rosa.
Alcuni batteri possono fermentare il lattosio lentamente o debolmente, sviluppando colonie rosa pallido e rimanere lattosio positivi.
Quelli che non fermentano il lattosio utilizzano i peptoni come fonte di energia, producendo ammoniaca, alcalinizzando il mezzo. Per questo motivo le colonie che si originano sono incolori o trasparenti.
Indicatore di pH
Il cambiamento di colore si ottiene attraverso un altro composto essenziale che ha l'agar MacConkey. Questo composto è l'indicatore di pH, che in questo caso è rosso neutro.
La fermentazione del lattosio genera la produzione di acidi misti. Acidificano il terreno fino a un pH inferiore a 6,8.
Ciò fa sì che l'indicatore di pH viri verso una tonalità rosa intenso. L'intensità del colore può variare a seconda del pH finale.
Acqua distillata, cloruro di sodio e agar
D'altra parte, contiene acqua distillata e cloruro di sodio che conferiscono al mezzo idratazione ed equilibrio osmotico. Infine, il terreno contiene agar, che è la base che fornisce la consistenza del terreno solido.
Il terreno agar MacConkey preparato dovrebbe avere un pH finale regolato a 7,1 ± 0,2.
Preparazione
Per un litro di agar MacConkey, devono essere pesati 50 g del terreno disidratato, quindi posti in un pallone e sciolti in un litro di acqua distillata. Dopo 10 minuti di riposo si scalda, mescolando continuamente fino all'ebollizione per 1 minuto.
Il pallone viene quindi posto in autoclave e sterilizzato a 121 ° C per 20 minuti. Al termine del tempo viene tolto dall'autoclave e lasciato raffreddare fino a raggiungere la temperatura di 45 ° C, per servire successivamente in piastre Petri sterili all'interno di una cappa a flusso laminare o davanti al becco Bunsen.
Lasciar solidificare e conservare in un portapiatti capovolto e conservare in frigorifero a 2-8 ° C fino al momento dell'uso.
Per ottenere un agar MacConkey che inibisce l'effetto swarning prodotto dal genere Proteus, viene utilizzato un agar MacConkey a basso contenuto di sale.
Usi dell'agar MacConkey convenzionale
MacConkey Agar è incluso in tutti i set di terreni di coltura predisposti per la semina dei campioni clinici ricevuti in laboratorio. È anche utile in microbiologia alimentare e microbiologia ambientale.
La varietà di bastoncini Gram negativi che crescono in questo terreno esprime caratteristiche fenotipiche che aiutano a fare una diagnosi presuntiva della specie in questione. Ad esempio la dimensione, il colore, la consistenza e l'odore delle colonie, sono alcune delle caratteristiche che possono guidare.
In questo terreno, le specie Escherichia coli, Klebsiella sp ed Enterobacter sp producono forti colonie rosa, circondate da una zona di bile precipitata.
Al contrario, batteri come Citrobacter sp, Providencia sp, Serratia sp e Hafnia sp possono apparire incolori dopo 24 ore o rosa pallido in 24-48 ore.
Allo stesso modo, i generi Proteus, Edwadsiella, Salmonella e Shigella producono colonie incolori o trasparenti.
Altre varianti dell'agar MacConkey
Esistono altre varianti di MacConkey Agar che hanno scopi specifici. Sono menzionati di seguito:
Agar MacConkey con sorbitolo
Questo terreno è stato progettato per distinguere il ceppo enteropatogeno (Escherichia coli enteroemorragico O157: H7) dal resto dei ceppi di Escherichia coli.
Questo terreno scambia il lattosio carboidrato con il sorbitolo. I ceppi enteroemorragici di E. coli O157: H7 si differenziano dagli altri perché non fermentano il sorbitolo e quindi si ottengono colonie trasparenti, mentre il resto dei ceppi di E. coli fermenta il sorbitolo e le colonie sono di colore rosa intenso.
Agar MacConkey senza violetto cristallino, né sale
Questo agar differisce notevolmente dal classico agar MacConkey, poiché non ha un cristallo viola e possono crescere batteri Gram positivi.
D'altra parte, l'assenza di sale inibisce la comparsa di brulicanti sull'agar prodotti da alcuni bacilli enterici, come quelli del genere Proteus, e facilita così l'isolamento di tutti i batteri presenti, compresi i batteri Gram positivi.
Agar MacConkey con cefoperazone
Questa variante dell'agar MacConkey è stata progettata per isolare inizialmente Laribacter hongkongensis e successivamente è stata trovata utile per l'isolamento di Arcobacter butzleri. Entrambi sono bastoncini Gram negativi leggermente ricurvi resistenti al cefoperazone.
Questi batteri sono stati recentemente collegati a causare gastroenterite e diarrea acquisita in individui asiatici ed europei, emergendo come due potenti patogeni emergenti.
L'antibiotico permette di inibire la flora accompagnatoria del tratto gastrointestinale, che favorisce lo sviluppo di questi batteri, impedendo loro di passare inosservati, poiché richiedono 72 ore per crescere.
Agar MacConkey preparato con acqua di mare al 10% v / v
Questa variante è utile per la valutazione degli indicatori sanitari batterici di contaminazione fecale, inclusi coliformi totali e coliformi fecali nelle acque salate ricreative (spiagge e baie).
Cortez et al nel 2013 hanno dimostrato che il terreno preparato in questo modo aumenta significativamente il recupero di questi microrganismi nell'ambiente salino, rispetto all'uso dell'agar MacConkey preparato con acqua distillata.
Ciò è dovuto al fatto che il terreno modificato stimola la crescita di batteri che sono fisiologicamente in uno stato di latenza "vitale ma non coltivabile", quindi non sono recuperabili nei terreni convenzionali.
Riferimenti
- Lau SK, Woo PC, Hui WT, et al. Uso dell'agar cefoperazone MacConkey per l'isolamento selettivo di Laribacter hongkongensis. J Clin Microbiol. 2003; 41 (10): 4839-41.
- Agar MacConkey. Wikipedia, l'enciclopedia libera. 4 aprile 2018, 18:16 UTC. 29 dicembre 2018, 15:22 en.wikipedia.org
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- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosi microbiologica. (5a ed.). Argentina, Editoriale Panamericana SA
- Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Effetto dei terreni di coltura preparati con acqua di mare sugli indicatori di salute nelle acque marine delle terme di Chichiriviche, stato di Falcón, Venezuela. Rev Soc Ven Microbiol 2013; 33: 122-128
- García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Microbiologia clinica pratica. Università di Cadice, 2a edizione. Servizio pubblicazioni UCA.