AGAR CZAPEK: LOGICA, PREPARAZIONE, USI E LIMITAZIONI - BIOLOGIA - 2024

Il Czapek (CZA) è un terreno solido selettivo specificamente progettato per la crescita di batteri e funghi saprofiti. È stato creato dal botanico Friedrich Johann Franz Czapek, di origine polacca, e dal chimico americano Arthur Wayland Dox; per questo motivo, questo agar è noto anche come terreno Czapek-Dox.

Il terreno originale era liquido, ma successivamente è stato aggiunto agar per renderlo un terreno solido. Il terreno Czapek è composto da nitrato di sodio, fosfato bipotassico, solfato di magnesio, cloruro di potassio, solfato ferroso, saccarosio, agar e acqua distillata.

Agar Czapek A. Aspergillus parasiticus B. Aspergillus fumigatus Fonte: A. Medmyco / B. Foto: Dr. David Midgley. Wikipedia.com

Il pH dell'agar Czapek è 7,3, ma esiste una variante a cui viene aggiunto acido lattico al 10%, il cui pH rimane a 3,5. Questo terreno acido è utilizzato per la coltivazione di microrganismi acidofili.

D'altra parte, alcune case commerciali hanno modificato la composizione dell'agar Czapek cambiando il solfato di magnesio e il fosfato bipotassico con il glicerofosfato; questa modifica impedisce la formazione del precipitato di fosfato di magnesio osservato con la formula convenzionale. Allo stesso modo, esiste un'altra variante a cui viene aggiunto l'estratto di lievito.

Infine, l'agar Czapek è raccomandato dall'American Public Health Association APHA per lo studio di Actinomycetes sp, Aspergillus sp, Paecilomyces sp e Penicillium sp. Queste specie si caratterizzano per essere microrganismi ambientali e patogeni opportunisti.

Base

Questo terreno contiene saccarosio; questo carboidrato funge da fonte di carbonio, mentre il nitrato di sodio è la fonte di azoto, ma a differenza di altri mezzi, l'azoto fornito è inorganico.

Per questo motivo il terreno Czapek è considerato selettivo, poiché possono crescere solo microrganismi in grado di utilizzare composti inorganici come unica fonte di azoto.

Come sostanza che regola l'osmolarità del terreno è il fosfato bipotassico. Da parte loro, il solfato di magnesio, il cloruro di potassio e il solfato ferroso forniscono minerali essenziali per la crescita dei microrganismi saprofiti (a vita libera). Questa formula forma un precipitato di fosfato di magnesio.

Infine, l'agar-agar è il composto che fornisce la consistenza solida al mezzo e l'acqua è il solvente per tutti i componenti.

Con la formula modificata dell'agar Czapek, non c'è formazione di precipitati e migliora le prestazioni di crescita di alcuni funghi.

L'estrema acidità dell'Agar Czapek Acid lo rende un terreno più selettivo, consentendo solo la crescita di microrganismi acidofili, in grado di utilizzare azoto inorganico. Nel frattempo, l'agar lievito Czapek migliora le prestazioni di alcuni funghi.

Preparazione

Czapek-Dox medio

Pesare 49 g del terreno di coltura disidratato e sciogliere in acqua distillata. Applicare calore fino all'ebollizione. Agitare spesso la miscela fino a completa dissoluzione.

-Czapek Agar Wedges

Distribuire la miscela disciolta nelle provette e sterilizzare in autoclave a 121 ° C per 15 minuti. Durante la rimozione dall'autoclave, omogeneizzare prima di deporre le provette e lasciare solidificare.

-Piastre di agar Czapek

Autoclavare la miscela disciolta a 121 ° C per 15 minuti e lasciarla raffreddare a 50 ° C, omogeneizzare e versare 20 ml in piastre Petri sterili. Lasciar solidificare, capovolgere e conservare in frigorifero fino al momento dell'uso.

Il pH dovrebbe rimanere a 7,3 ± 0,2. Il colore del mezzo disidratato è bianco e il mezzo preparato è ambra chiaro, leggermente torbido a causa della presenza di un precipitato flocculante.

Terreno Czapek a pH acido

Preparare come già descritto, ma aggiungendo 10 ml di acido lattico sterile al 10% per ogni litro di terreno preparato. Il terreno Czapek modificato dovrebbe essere a pH 3,5 ± 0,2.

Czapek Medium modificato

Pesare 45,4 g di terreno disidratato e sciogliere in 1 litro d'acqua. Il resto della preparazione è lo stesso descritto sopra. Il colore del terreno disidratato è bianco e il terreno preparato è biancastro. Il pH finale del mezzo è 6,8 ± 0,2.

Czapek-lievito medio

Chiamato anche Czapek Yeast Extract Agar (CYA). Contiene gli elementi del classico agar Czapek più l'estratto di lievito.

Uso

Il terreno Czapek viene utilizzato per la ricerca di microrganismi saprofiti in campioni di terreno, verdure, cereali, aria, insetti, tra gli altri.

L'agar Czapek a pH acido viene utilizzato per la crescita di microrganismi acidofili, mentre l'agar Czapek modificato è particolarmente utile per la formazione di clamidospore nelle specie del complesso Candida albicans.

Infine, l'agar di lievito Czapek è molto utile per l'isolamento di Aspergillus e Penicillium.

Sown

-Czapek agar

Per cercare gli Actinomiceti nel terreno, procedere come segue: il campione viene trattato con acqua fenolizzata per 30 min e poi 1 mL della sospensione viene seminato su agar Czapek. Incubare a 28 ° C per 5-7 giorni.

Per i campioni di verdure, cereali e insetti vengono posti direttamente sull'agar. Puoi anche fare diluizioni e seminare 0,1 ml sulla superficie dell'agar.

-Agar Czapek modificato

Per la semina si utilizza un'ansa o un ago diritto, si impregnano con il tampone e si inocula l'agar praticando una puntura fino a toccare la base della piastra. Incubare per 24 ore a 28 ° C ed esaminare al microscopio sopra e sotto la piastra per vedere se si sono formate clamidospore.

Temperatura e tempo di incubazione

La temperatura e il tempo di incubazione variano a seconda del tipo di microrganismo da isolare. Le piastre vengono generalmente incubate per una o due settimane a una temperatura compresa tra 20 e 25 ° C.

Tuttavia, esistono condizioni specifiche per alcuni ceppi. Ad esempio, la maggior parte delle specie del genere Aspergillus crescono in modo ottimale a 30 ° C; tuttavia A. fumigatus cresce a 50 ° C.

Per quanto riguarda il tempo di incubazione una o due settimane è normale, tuttavia, la Candida albicans può svilupparsi in 24-48 ore a 25 ° C.

Caratteristiche di alcune colonie su questo terreno

-Penicillium atrovenetum

Si sviluppa in 12 giorni di incubazione a 27 ° C. Le loro colonie sono piccole (25 mm).

Le colonie hanno un aspetto vellutato, con un bordo bianco definito e una tonalità blu-verde al centro che diventa grigia con l'invecchiamento. Il retro della colonia è arancione, rendendo il centro dello stesso colore a causa della produzione di pigmento.

-Aspergillus niger

Si sviluppa con micelio da bianco a giallo e spore nere.

-Candida albicans

Si sviluppano colonie cremose beige chiaro. Nell'agar Czapek modificato forma clamidospore.

-Aspergillus parasiticus

Un micelio verde scuro si sviluppa in 7 giorni a 25 ° C.

QA

Per valutare la qualità del terreno di coltura, possono essere piantati ceppi di controllo certificati, come: Aspergillus niger MKTA 16404, Candida albicans MKTA 10231.

Aspergillus niger sviluppa micelio da bianco a giallo e spore nere in circa 5 giorni, mentre Candida albicans avrà una crescita soddisfacente in 24 ore di incubazione a 25 ° C; le colonie sono color crema.

limitazioni

Alcuni studi hanno rivelato che per il recupero degli Actinomiceti, l'agar con la resa migliore è l'agar destrosio di patate, con l'agar Czapek al secondo posto, ma per il recupero di Aspergillus e Penicillium, l'agar Czapek è quello che fornisce il più alto tasso di recupero.

Riferimenti

1. Dávila M, et al. Actinomiceti antagonisti contro funghi fitopatogeni di importanza agricola. Rev. Mex. Scienza. Agríc 2013, 4 (8): 1187-1196. Disponibile su: scielo.org.
2. Luna M, Lozada Y, Wheats Á. Isolamento di ceppi di Aspergillus niger, produttori di ocratossina A, nel caffè verde conservato (Coffea arabica). Rev. Mex. Mic. 2010; 32: 63-68. Disponibile su.scielo.org.
3. Collaboratori di Wikipedia. Czapek medium. Wikipedia, l'enciclopedia libera. 13 gennaio 2019, 20:30 UTC. Disponibile su: en.wikipedia.org
4. Laboratori Conda Pronadisa. Agar Czapek-Dox modificato. Disponibile su: condalab.com
5. Microkit per terreni di coltura. Czapek-Dox Agar. Diosponibile in: Medioscultivo.com