- CLED Agar Rationale
- Razionale per l'agar CLED (Bevis)
- applicazioni
- Semina di campioni di urina
- Interpretazione
- ID
- Preparazione
- Riferimenti
L' agar CLED ( Cystine -Lactose-Electrolyte-Deficient) è un terreno di coltura solido differenziale, utilizzato per la diagnosi delle infezioni del tratto urinario. La composizione del terreno di coltura è studiata per la buona crescita dei patogeni urinari ed è ideale per la quantificazione delle unità formanti colonie (CFU).
Il terreno di coltura CLED non è selettivo, poiché al suo interno possono crescere microrganismi Gram negativi e Gram positivi. Ma questo non è un problema, poiché la maggior parte delle infezioni del tratto urinario è causata da un solo tipo di microrganismo.
Agar CLED
In caso di infezioni polimicrobiche si possono ottenere 2 o 3 batteri diversi, ma è molto raro e il più delle volte si tratta di campioni contaminati.
Tra i batteri Gram negativi che possono crescere in questo terreno ci sono i bacilli appartenenti alla famiglia delle Enterobacteriaceae e altri bacilli enterici, gli uropatogeni più frequentemente isolati nei campioni di urina sono i seguenti: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, tra gli altri.
Allo stesso modo, tra i batteri Gram positivi che possono crescere in questo terreno ci sono Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp e anche i lieviti, come il complesso Candida albicans, possono crescere.
Tuttavia, a causa della composizione chimica del terreno, non consente la crescita di alcuni patogeni genito-urinari esigenti, come Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, tra gli altri.
CLED Agar Rationale
Il terreno di coltura CLED contiene estratto di carne, idrolizzato di caseina pancreatico e idrolizzato di gelatina come fonte di energia. Forniscono i nutrienti per lo sviluppo di batteri poco esigenti.
Contiene anche cistina, un amminoacido che permette la crescita dei coliformi, distinguibili per le loro piccole dimensioni.
Allo stesso modo, contiene lattosio come carboidrato fermentabile, per questo motivo questo terreno è differenziale; essere in grado di distinguere i batteri in fermentazione da quelli che non fermentano il lattosio.
I batteri in fermentazione fanno cambiare il pH del terreno a causa della produzione di acidi, sviluppando colonie gialle, mentre i batteri non fermentanti non generano cambiamenti nel terreno, quindi assumono il colore dell'agar originale, il verde.
La reazione di fermentazione si rivela grazie alla presenza dell'indicatore di pH, che in questo mezzo è il blu di bromotimolo.
D'altra parte, la bassa concentrazione di elettroliti del mezzo inibisce la tipica crescita invasiva del genere Proteus, chiamata effetto sciamante. Ciò genera un vantaggio rispetto ad altri media, poiché consente il conteggio di CFU, anche se è presente il genere Proteus.
Tuttavia, la bassa concentrazione di elettroliti inibisce la crescita di alcune specie del genere Shigella, essendo questo uno svantaggio rispetto ad altri mezzi.
Razionale per l'agar CLED (Bevis)
C'è una variante o una modifica di questo mezzo fatta da Bevis, che ha incorporato la fucsina acida (l'indicatore di Andrade) nella composizione originale. Funziona in combinazione con il blu di bromotimolo per differenziare la fermentazione dai batteri non fermentanti.
La differenza tra terreno convenzionale e modificato è il colore che assumono le colonie. Nel caso dei batteri fermentanti il lattosio, le colonie assumono un colore rosso-arancio con un alone rosa o rosso, mentre quelle non fermentanti sono grigio-bluastre.
applicazioni
L'agar CLED viene utilizzato esclusivamente per la semina di campioni di urina. L'uso di questo mezzo è particolarmente frequente nei laboratori europei, mentre in America è meno utilizzato.
La raccolta dei campioni deve soddisfare determinati parametri per ottenere risultati affidabili, tra cui:
- Non prendere antibiotici prima del campionamento.
- È preferibile prelevare l'urina per prima cosa al mattino, poiché è più concentrata, quando non è possibile prelevare il campione con metodi invasivi.
- Lavare bene i genitali prima di prelevare il campione.
- Eliminare il primo flusso di minzione e quindi posizionare il contenitore.
- Raccogliere da 25 a 30 ml di urina in un contenitore sterile ben etichettato.
- Portare immediatamente al laboratorio circondato dal ghiaccio.
- Deve essere lavorato entro 2 ore dall'emissione o refrigerato a 4 ° C per un massimo di 24 ore.
Semina di campioni di urina
Il campione di urina deve essere diluito 1:50.
Per la diluizione, versare 0,5 ml di urina del paziente e diluire con 24,5 ml di soluzione fisiologica sterile.
Misurare 0,1 ml di urina diluita e distribuire in superficie con una spatola drigalski sul terreno CLED. Questo è il miglior metodo di semina per contare le colonie. Per questo motivo viene utilizzato nei campioni di urina, poiché i risultati devono essere espressi in CFU / ml.
Per quantificare le colonie ottenute procedere come segue: contare le colonie sulla piastra e moltiplicarle per 10 e poi per 50. Si ottiene così la quantità di CFU / ml di urina.
Interpretazione
Conta oltre 100.000 CFU / ml -– Indica un'infezione urinaria
Conta inferiore a 1000 CFU / ml - Nessuna infezione
Conta tra 1000-10.000 CFU / ml - Dubbiosi, possibile contaminazione, campionamento ripetuto.
ID
Le colonie coltivate su CLED agar devono avere un Gram e, a seconda delle caratteristiche morfotintoriali del microrganismo, viene eseguita una certa subcoltura.
Ad esempio, se si tratta di un bacillo Gram negativo, verrà seminato su un agar MacConkey, dove viene confermata la fermentazione o meno del lattosio. Inoltre, viene applicato un agar nutriente per eseguire il test dell'ossidasi.
Nel caso in cui il Gram riveli cocchi Gram positivi, può essere sottoposto a subcoltura su agar salato al mannitolo e su agar nutriente. In quest'ultimo si esegue il test della catalasi. Infine, se si osservano lieviti, verrà seminato su Agar Sabouraud.
Molti laboratori evitano l'uso del terreno CLED e preferiscono utilizzare solo agar sangue, MacConkey e agar nutriente per seminare campioni di urina.
Preparazione
In un matraccio con un litro di acqua distillata sciogliere 36,2 g di polvere di agar CLED. Dopo 5 minuti di riposo, riscaldare l'agar risospeso, mescolando costantemente a ebollizione per 1 minuto.
Quindi sterilizzare a 121 ° C per 15 minuti in autoclave. Al termine del tempo si sfila dall'autoclave e si lascia raffreddare ad una temperatura di 45 ° C. Successivamente, 15-20 ml vengono serviti in ciascuna capsula Petri sterile.
La procedura di servizio del piatto deve essere eseguita all'interno di una cappa a flusso laminare o davanti al becco Bunsen per evitare contaminazioni.
I piatti serviti vengono lasciati solidificare, disposti su una griglia capovolta e conservati in frigorifero (2-8 ° C) fino al momento dell'uso.
Il pH finale del terreno preparato dovrebbe essere 7,3 ± 0,2.
Riferimenti
- Raccomandazioni per la diagnosi microbiologica dell'infezione urinaria. chil. infectol. 2001; 18 (1): 57-63. Disponibile su: scielo.org.
- Panchi J. Identificazione dell'agente microbico che causa infezioni del tratto urinario in pazienti ricoverati sottoposti a cateterismo vescicale. 2016. Lavoro universitario per l'abilitazione alla Laurea in Laboratorio Clinico. Università Tecnica di Ambato. Ecuador.
- Britannia Laboratories. Medio CLED. Disponibile su: britanialab.com.
- Renylab Laboratories. Istruzioni per l'uso, CLED Agar. 2013 Disponibile su: es.renylab.ind.br.
- Laboratori cultuali. Manuale di base di microbiologia. Disponibile su: ictsl.net.
- Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, Díaz MD, Vicente T, Bouza E. L'opzione di agar CLED nella routine di urinocoltura. Una valutazione prospettica e comparativa. Diagnosi Microbiol Infect Dis. 1992; 15 (4): 287-90.
- García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Microbiologia clinica pratica. Università di Cadice, 2a edizione. Servizio pubblicazioni UCA.