AGAR CIOCCOLATO: BASE, USI E PREPARAZIONE - BIOLOGIA - 2024

L' agar cioccolato è un terreno di coltura solido, arricchito, non selettivo e non differenziale. Viene utilizzato principalmente per l'isolamento di microrganismi esigenti dal punto di vista nutrizionale, sebbene in esso possa crescere qualsiasi tipo di batterio.

Per questo motivo, la sua utilità aumenta soprattutto nella semina di campioni normalmente sterili, come CSF e liquido articolare. Sebbene sia incluso anche nei mezzi scelti per la semina di campioni polimicrobici, ma in questi casi è necessaria l'aggiunta di antibiotici che inibiscono la flora concomitante.

Agar cioccolato con crescita batterica

Questo mezzo ha un caratteristico colore marrone molto simile al cioccolato, da cui il nome. La preparazione è molto simile a quella dell'agar sangue, solo in questo caso il sangue deve essere riscaldato affinché i globuli rossi si degradino.

La sua preparazione, come l'agar sangue, è molto delicata, in quanto facilmente contaminabile. Per questo molti laboratori preferiscono acquisire questo mezzo già preparato da società commerciali che ne garantiscono la qualità.

Base

Questo terreno è costituito da una base di agar ricca di sostanze nutritive e sangue riscaldato. L'emolisi dei globuli rossi fornisce il fattore X (emina) e il fattore V (NAD), necessari per la crescita di alcuni microrganismi, come il genere Haemophilus. È anche molto utile per l'isolamento di Neisserias sp.

Come l'agar sangue, diversi terreni possono essere utilizzati come agar base a seconda delle necessità. Tra i terreni utilizzati vi sono l'infusione cervello-cuore e la tripticasi di soia, sebbene i più consigliati siano l'agar Columbia, Müeller Hinton, GC agar e Thayer Martin agar.

Alcune varianti di agar cioccolato includono un integratore fortificato disponibile in commercio chiamato Isovitalex o Polivitex.

Questi integratori contengono vitamina B ₁₂ , L-glutammina, adenina, guanina cloridrato, acido p-amminobenzoico, nicotinamide adenina dinucleotide (NAD), tiamina pirofosfato, nitrato ferrico, tiamina cloridrato, cisteina cloridrato, L-cistina e glucosio.

È importante notare che l'agar cioccolato è più arricchito dell'agar sangue, ma non consente l'osservazione dei modelli di emolisi.

applicazioni

Fonte: pixnio.com. Autore:
Pete Seidel, Amanda Moore, MT, Todd Parker, PhD, Audra Marsh, USCDCP

Agar cioccolato preparato con agar Columbia

Questo terreno contiene digestato pancreatico di caseina e cuore, digestato peptico di carne, cloruro di sodio, agar, estratto di lievito e amido di mais. È inoltre ricco di vitamine, minerali e aminoacidi essenziali.

Questa base sanguigna riscaldata è ideale per l'isolamento dei batteri del genere Neisseria. D'altra parte, se al terreno viene aggiunto un supplemento per Brucella, il microrganismo menzionato può essere isolato. I risultati sono migliorati usando il sangue di cavallo.

Agar cioccolato preparato con GC base agar (per gonococchi)

Questo terreno contiene peptoni, amido di mais, tamponi monobasici e bibasici, cloruro di sodio e agar.

La maggior parte delle presentazioni di agar cioccolato preparate in commercio sono dotate di questa base e non contengono sangue riscaldato, ma piuttosto una miscela sintetica di emina e un integratore chimico di fattori di crescita, vitamine, minerali, aminoacidi, fattore V e glucosio.

Agar cioccolato preparato con agar Müeller Hinton

Viene utilizzato per testare la suscettibilità antimicrobica di microrganismi esigenti, come Streptococcus pneumoniae, utilizzando sangue di pecora riscaldato al 5%.

Viene utilizzato anche per l'isolamento primario di Neisserias e Haemophilus, ma nel caso particolare dell'isolamento di Haemophilus è preferito l'uso di sangue di cavallo, in quanto è una ricca fonte di fattore X e V.

Se invece il campione da seminare proviene da una zona non sterile, si consiglia l'aggiunta di antibiotici per inibire la normale flora della zona.

Esempio di campioni respiratori in cui si sospetta la presenza di batteri del genere Haemophilus, la bacitracina viene utilizzata per inibire la crescita di Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus e Neisserias saprofitiche.

Nel caso di campioni di cellule genitali, in cui si sospetta Haemophilus ducreyi, è stato utilizzato con successo un agar cioccolato preparato come segue: Müeller - Agar Hinton con 5% di sangue di cavallo cioccolato, 1% di arricchimento Isovitalex e 3 µg / ml di vancomicina.

Agar cioccolato preparato con agar Thayer Martin

Questo terreno è speciale per l'isolamento di Neisseria gonorrhoeae. Deve contenere antibiotici per inibire la flora accompagnatoria. Viene usato sangue di agnello.

Preparazione

Dovresti vedere le indicazioni per la preparazione dell'agar base da utilizzare. Si trovano sul retro del contenitore del mezzo disidratato. In genere descrivono quanto devi pesare per preparare un litro di terreno di coltura.

La quantità esatta necessaria può essere preparata in laboratorio, può essere più o meno di un litro.

calcoli

Una regola di tre viene utilizzata per calcolare quanto pesare per preparare il volume desiderato. Esempio:

Se per 1 litro è necessario pesare 40 gr e il laboratorio richiede 800 ml, si dice:

1000 ml ----------- 40 gr

800 ml -----------– X

La formula sarà la seguente:

X = 32 gr (quantità da pesare per 800 ml).

Pesare e sciogliere

La quantità necessaria viene pesata e posta in un pallone con l'acqua.

Scaldare a fuoco moderato e mescolare delicatamente con movimenti rotatori fino a quando il terreno disidratato si dissolve completamente, lasciandolo bollire per 1 minuto.

Sterilizzare

Il pallone viene posto nell'autoclave per sterilizzare il terreno a 121 ° C per 20 minuti.

Aggregato di sangue

Quando si lascia l'autoclave, si lascia riposare fino a quando la temperatura del terreno è di circa tra 56 e 70 ° C per posizionare il sangue e mescolare fino a quando il terreno diventa marrone.

Se stai aggiungendo integratori, questo è il momento di farlo. Successivamente mescolare e servire 20 ml per ciascuna capsula Petri sterile.

L'intera procedura deve essere eseguita in una cappa a flusso laminare o attorno al becco Bunsen.

Lasciate riposare finché non si solidificano e conservate capovolte in frigo.

Un altro modo per preparare l'agar al cioccolato senza usare il sangue

Il mezzo di base viene preparato come descritto sopra, l'emoglobina disidratata ottenuta in commercio viene sciolta e sterilizzata in autoclave.

Entrambe le soluzioni vengono lasciate raffreddare a 50 ° C, vengono unite e viene aggiunto il supplemento. Mescolare in condizioni asettiche e poi servire in piastre Petri sterili.

QA

È importante che il sangue sia posto alla temperatura indicata, in quanto è l'ideale per lisare i globuli rossi e allo stesso tempo mantenere il fattore V, che è termosensibile.

Non devono rimanere bolle sulla superficie dell'agar. Da ogni lotto di 100 piastre, una o due piastre devono essere incubate in forno a 37 ° C per 24 ore per verificarne la sterilità.

Per risultati ottimali, utilizzare l'agar cioccolato subito dopo la preparazione.

I ceppi batterici di controllo devono essere conservati in laboratorio per valutare l'efficacia del terreno fresco per la crescita dei principali microrganismi esigenti di importanza clinica.

Riferimenti

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5. Collaboratori di Wikipedia. Agar cioccolato. Wikipedia, l'enciclopedia libera. 17 dicembre 2018, 19:54 UTC. Disponibile su: en.wikipedia.org.