L' agar cetrimide o cetrimide è un terreno di coltura solido selettivo progettato per l'isolamento di Pseudomonas aeruginosa. Si basa sulla rappresentazione della produzione di pigmenti caratteristici di questa specie ed è stato ottenuto dalla modifica dell'agar Tech, creato da King, Ward e Raney.
La formula originale conteneva sali di cloruro di magnesio, solfato di potassio, digestione pancreatica di gelatina e agar-agar. La modifica della formula consisteva nell'aggiunta di cetrimide (cetil trimetil ammonio bromuro) e glicerolo.
Agar cetrimide seminato con Pseudomonas aeruginosa Fonte: BiotechMichael, da Wikimedia Commons
L'agar cetrimide è utile per lo studio microbiologico di campioni in cui si sospetta la presenza di Pseudomonas aeruginosa. Va notato che questo batterio è estremamente importante, perché sebbene faccia parte del normale microbiota ambientale, spesso si comporta come un patogeno opportunista.
Per questo motivo, uno dei problemi più comuni causati da questo germe sono le infezioni nosocomiali, cioè quelle che si verificano all'interno dell'ambiente ospedaliero, attaccando i pazienti che hanno un sistema immunitario depresso.
D'altra parte, a causa dell'affinità che questo microrganismo ha con l'umidità, gli obiettivi di contaminazione più vulnerabili sono: apparecchiature per la respirazione assistita, medicinali, nebulizzatori, sorgenti d'acqua, condizionatori d'aria, disinfettanti, soluzioni saponose, soluzioni iniettabili, ferite aperte , cateteri, tubi urinari, tra gli altri.
In questo senso, l'agar cetrimide è utile per effettuare controlli microbiologici e colture degli elementi precedentemente citati.
Base
L'agar cetrimide si basa sulla capacità del terreno di promuovere la crescita di P. aeruginosa, stimolare la produzione dei suoi pigmenti ea sua volta inibire la crescita di altri microrganismi.
Queste proprietà sono dovute alla funzione di ciascuno dei suoi componenti. Il peptone di gelatina presente funge da fonte di azoto, vitamine e minerali. Il glicerolo o la glicerina funzionano come fonte di carbonio.
Da parte sua, la cetrimide (cetil trimetilammonio bromuro) è la sostanza che inibisce la crescita di batteri diversi da P. aeruginosa, comprese altre specie appartenenti allo stesso genere.
L'inibizione avviene perché la cetramide agisce come un detergente cationico, riuscendo a destabilizzare la membrana plasmatica della maggior parte dei batteri, ad eccezione di P. aeruginosa e alcuni altri che riescono a sopravvivere.
D'altra parte, contiene cloruro di magnesio e solfato di potassio. Questi composti stimolano l'espressione fenotipica correlata alla capacità di Pseudomonas aeruginosa di produrre vari pigmenti, tra cui: piocianina, pioverdina, piorrubina, piomelanina e fluoresceina. Infine, contiene agar-agar, che gli conferisce una consistenza solida.
Interpretazione
L'interpretazione della crescita ottenuta in questo agar viene eseguita come segue:
L'osservazione di colonie rotonde, lisce, con margini regolari, con produzione di pigmenti blu-verdastri, verdi, marroni o rossastri, più l'emissione di odore fruttato (aminoacetofenone), è un risultato presunto della presenza di questo batterio in detto campione.
D'altra parte, l'osservazione di un pigmento giallo-verdastro brillante sulle colonie è indicativa di P. aeruginosa quando la piastra è esposta alla luce ultravioletta.
Fluorescenza delle colonie di P. aeruginosa su agar cetrimide sotto luce ultravioletta.
Va notato che ogni colore osservato è dovuto alla produzione di un pigmento specifico. Il pigmento blu-verde corrisponde alla produzione di piocianina, il verde alla piooverdina, il rossastro alla piorubina, il marrone alla piomelanina e la fluorescenza giallo-verde brillante sotto la luce UV alla fluoresceina.
Preparazione
Pesare 43 g di terreno disidratato e sciogliere in acqua distillata. Aggiungi 10 ml di glicerolo. Porta la miscela a una fonte di calore. Lasciate bollire per qualche minuto fino a completa dissoluzione.
Autoclave a 121 ° C per 15 minuti. Lasciar riposare e servire in piastre Petri sterili quando la temperatura è intorno ai 50 ° C.
Lasciar solidificare, capovolgere, ordinare in plaqueros e conservare in frigorifero fino al momento dell'uso. Le piastre di agar cetrimide devono essere tolte dal frigorifero prima della semina e lasciate che raggiungano la temperatura ambiente.
Il pH finale del mezzo dovrebbe essere 7,2 ± 0,2.
Il colore del terreno disidratato è beige e il preparato è bianco opaco.
applicazioni
Tutti i tipi di campioni in cui si sospetta la presenza di Pseudomonas aeruginosa possono essere seminati su agar cetrimide. Pertanto, è utile in tutti i settori della microbiologia (ambientale, industriale, clinica, idrica e alimentare).
È di grande importanza analizzare gli ambienti ospedalieri e quindi essere in grado di applicare misure correttive, poiché questo microrganismo raggiunge i pazienti attraverso apparecchiature, medicinali, soluzioni e forniture contaminati che vengono utilizzati dal paziente.
In questo modo il microrganismo può infettare le basse vie respiratorie, le vie urinarie e le ferite di pazienti immunosoppressi.
La conta delle colonie di P. aeruginosa può essere eseguita anche nei test sui limiti microbici.
Sown
L'agar cetrimide può essere utilizzato come coltura primaria. La piastra viene inoculata su uno dei suoi bordi e da lì si distribuisce per esaurimento al resto della piastra. I campioni liquidi possono essere seminati in superficie con una spatola drigalski.
Le piastre vengono incubate in aerobiosi a 37 ° C per 24 ore di incubazione.
limitazioni
-Una piccola percentuale di ceppi di Pseudomonas aeruginosas non produce piocianina, quindi un falso negativo può essere interpretato.
-Alcune specie di Pseudomonas di importanza clinica sono inibite in questo terreno.
-Nonostante le caratteristiche descritte per Pseudomonas aeruginosa, devono essere confermate con ulteriori test di identificazione. Un test da non perdere è il test dell'ossidasi, deve dare positivo.
-Alcune Enterobacteriaceae possono crescere in questo terreno e sviluppare un pigmento giallo, ma differisce da Pseudomonas aeruginosa per il fatto che quando la placca è sottoposta alla luce ultravioletta non c'è fluorescenza.
- Serratia marcescens riesce a svilupparsi e produce un pigmento rosa.
-Se le piastre seminate con agar cetrimide vengono esposte per un po 'a temperatura ambiente, i ceppi di P. aeruginosa possono perdere la fluorescenza osservata alla luce ultravioletta, tuttavia la proprietà viene recuperata se vengono incubati nuovamente a 37 ° C.
QA
Per analizzare le buone prestazioni dell'agar cetrimide, possono essere utilizzati ceppi di controllo, come: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637, Escherichia coli ATCC 25922 e Staphylococcus aureus ATCC 25923.
I risultati attesi sono:
- Buona crescita per P. aeruginosa, con pigmento blu-verde e fluoresceina positiva.
- S. maltophilia e S. aureus saranno parzialmente o completamente inibiti.
- Escherichia coli dovrebbe essere completamente inibito.
Riferimenti
- Callicó A, Cedré B, Sifontes S, Torres V, Pino Y, Callís A, Esnard S. Caratterizzazione fenotipica e sierologica di isolati clinici di Pseudomonas aeruginosa. VacciMonitor. 2004; 13 (3): 1-9.
- Laboratori Conda Pronadisa. Base di agar cetrimide. 2014, disponibile su: condalab.com
- Britannia Laboratories. Agar cetrimide. 2015 Disponibile su: britanialab.com
- BD Laboratories. BD Pseudosel agar (agar Cetrimide). 2013, disponibile su: bd.com
- Francisco Soria Melguizo Laboratory, CA Agar cetrimide. Disponibile su: http://f-soria.es