L' agar BIGGY è una coltura differenziale selettiva e media solida. È stato progettato per isolare e aiutare nell'identificazione delle principali specie di Candida. Il suo nome BIGGY deriva dall'acronimo in inglese Bismuth Glucose Glycine Yeast.
La formula originale è stata creata da Nickerson, motivo per cui questo terreno è noto anche come agar Nickerson. Attualmente è composto da estratto di lievito, glicina, destrosio, citrato di ammonio, citrato di bismuto, solfito di sodio e agar.
Rappresentazione grafica di BIGGY agar. Fonte: Flickr.com
BIGGY agar è formulato per la differenziazione delle specie Complex C. albicans, C. tropicalis, C. krusei e C. kefyr, ma crescono anche altre specie come Candida glabrata, C. parapsilosis, C. guilliermondii, Trichosporun sp, Geotrichum candidum e Saccharomyces cerevisiae.
Ha una buona sensibilità e specificità, tuttavia, rispetto ad altri media con una funzione simile, è al secondo posto, essendo superato da CHROMagar. Per questo molti laboratori preferiscono quest'ultima, sebbene sia molto più costosa.
Dovrebbe essere chiaro che l'uso di BIGGY agar, così come altri mezzi simili, aiuta una rapida identificazione presuntiva, ma mai confermativa. Pertanto, devono essere disponibili metodi di identificazione aggiuntivi; ad esempio, i sistemi di identificazione Vitek 32 e API 20.
Base
L'agar BiGGY è considerato un terreno parzialmente selettivo per l'isolamento dei lieviti, in particolare del genere Candida, sebbene possano crescere altri generi.
È anche un mezzo differenziale perché a seconda delle specie coinvolte si osserveranno caratteristiche differenti in termini di aspetto, colore, forma e dimensione. È considerato un terreno cromogenico, a causa dello sviluppo di diversi colori nelle colonie.
Il colore delle colonie di lievito è dovuto alla presenza di bismuto solfito nell'agar. Nickerson si rese conto che i lieviti del genere Candida eseguono una riduzione extracellulare del solfito di bismuto, trasformandolo in solfuro di bismuto (una sostanza nera insolubile). Ciò si traduce in colonie da marrone chiaro a nero.
Questo agar contiene estratto di lievito e destrosio, che fornisce la fonte di nutrienti di base ed energia per lo sviluppo del lievito. La glicina è uno stimolante della crescita del lievito, mentre inibisce la crescita di alcuni batteri.
In questo stesso senso, l'ammonio e il citrato di bismuto, così come il solfito di sodio, agiscono come inibitori della crescita batterica. L'agar è l'agente che conferisce la consistenza mediamente solida.
Preparazione
Pesare 45 g del terreno di coltura disidratato e sciogliere in un litro di acqua distillata. Agitare e riscaldare la miscela, facendo bollire per 1 minuto fino a completa dissoluzione. Questo terreno di coltura non è autoclavabile.
Dopo il raffreddamento a circa 45 ° C a bagnomaria, versare 20 ml su piastre Petri sterili.
Il colore del mezzo disidratato è grigio giallastro e preparato è un gel bianco giallastro, in cui si può osservare un leggero precipitato flocculante.
Il pH dovrebbe essere 6,8 ± 0,2.
Il terreno preparato deve essere conservato in frigorifero (4 ° C) e protetto dalla luce. Poiché è un mezzo che non può essere autoclavato, dovrebbe essere utilizzato il prima possibile. Il suo utilizzo è consigliato entro 3 giorni dalla sua preparazione.
Uso
Le piastre vengono incubate a temperatura ambiente (25 ° C) per 24, 48 e 72 ore e il tempo di incubazione può essere esteso fino a 5 giorni.
Ogni specie di Candida sviluppa determinate caratteristiche che le distinguono l'una dall'altra. I produttori del terreno descrivono le seguenti caratteristiche per ciascuna specie:
-Candida albicans complex: si sviluppa su questo agar come colonie lisce, rotonde, marroni o nere, con un leggero bordo miceliale. Con l'eccezione che il colore scuro non si diffonde al centro.
-Candida tropicalis: colonie luminose, piccole, marrone scuro con un centro nero e un leggero bordo miceliale. Il colore scuro si diffonde verso la metà, caratteristica tipica di questa specie, dopo essere stata incubata per 72 ore.
-Candida krusei sviluppa colonie grandi, piatte, dall'aspetto ruvido con un bordo da marrone a nerastro.
-Candida parakrusei: colonie di media grandezza, il più delle volte ruvide, piatte. Il colore può variare dal marrone rossastro scuro brillante al marrone rossastro chiaro. Il confine delle colonie ha un vasto micelio giallastro.
-Candida stellatoidea: sviluppa colonie medie, piatte, marrone scuro, quasi nere. Lo sviluppo miceliale è molto scarso.
Uno studio condotto da Yücesoy e Marol nel 2003, ha dimostrato che il terreno CHROMagar ha una migliore sensibilità e specificità per la differenziazione e l'identificazione di diverse specie di Candida rispetto all'agar BIGGY.
QA
Per il controllo della sterilità, le piastre non inoculate vengono incubate a 25 ° C, al buio per 24-48 ore, si prevede che non vi sia crescita di alcun tipo o cambiamento di colore.
I ceppi ATCC raccomandati per il controllo di qualità del terreno sono:
Complesso Candida albicans ATCC 60193, Candida glabrata ATCC 2001, Candida krusei ATCC 34135. In tutti si prevede una crescita come descritto sopra.
Possono essere utilizzati anche i seguenti ceppi:
Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 e Staphylococcus epidermidis ATCC 12228. Nei primi due è prevista l'inibizione totale, ma in caso di crescita parziale le colonie saranno color crema.
Nel caso di S. aureus, ci si aspetta che sia totalmente inibito, ma se cresce parzialmente, le sue colonie sono bianche.
limitazioni
Alcuni batteri sono in grado di crescere in questo terreno e possono persino diventare di colore scuro, simulando una colonia di Candida, ma quando si spalma la colonia e la si osserva al microscopio, viene facilmente scartata.
Tabella: Caratteristiche delle colonie di alcuni lieviti su BIGGY agar secondo il lavoro di Yücesoy M e Marol S.
Fonte: Yücesoy M, Marol S. Prestazioni di CHROMAGAR candida e BIGGY agar per l'identificazione delle specie di lievito. Ann Clin Microbiol Antimicrob. 2003; 2 (8): 1-7
Riferimenti
- Yücesoy M, Marol S. Prestazioni di CHROMAGAR candida e BIGGY agar per l'identificazione delle specie di lievito. Ann Clin Microbiol Antimicrob. 2003; 2 (8): 1-7.
- MCD LAB. Scheda tecnica BIGGY Agar. Disponibile su: mcdlab.net/
- Lab Neogen. BIGGY Agar. Disponibile su: foodsafety.neogen.com
- Laboratori Conda Pronadisa. BIGGY agar. Disponibile su: condalab.com
- BD Laboratories. BD BiGGY Agar (Bismuth Glucose Glycine Yeast Agar). Disponibile su: bd.com