- Base
- Preparazione
- Cunei
- Piatti
- Preparazione dell'agar sangue
- applicazioni
- Utilizzare senza supplementi
- Come base agar per la preparazione di altri terreni
- arricchito
- Selettivo
- QA
- Riferimenti
Il terreno agar BHI agar o Brain Heart Infusion è una coltura solida nutritiva. In spagnolo lo chiamiamo agar per infusione di cuore cerebrale. È un terreno di coltura non selettivo, il che significa che possono svilupparsi tutti i tipi di batteri Gram positivi e Gram negativi, nonché alcuni lieviti e funghi filamentosi.
È composto da un infuso di cervello e cuore di vitello, idrolizzato peptico di tessuti animali, idrolizzato pancreatico di caseina, cloruro di sodio, glucosio, fosfato disodico e agar.
Piastre BHI. Fonte: foto scattata dall'autore MSc. Marielsa Gil.
Va notato che l'agar BHI è uno dei terreni di coltura più utilizzati nei laboratori di batteriologia. Può essere utilizzato senza integratori come coltura primaria, sottocoltura di colonie ottenute su altri terreni selettivi o per il mantenimento dei ceppi in laboratorio.
D'altra parte, è un terreno ideale da utilizzare come base nella preparazione di terreni arricchiti, come agar sangue e agar cioccolato. Entrambi sono ideali per isolare microrganismi esigenti dal punto di vista nutrizionale. Tuttavia, va notato che poiché contiene glucosio non è adatto per l'osservazione dei modelli di emolisi.
Allo stesso modo, l'agar BHI può essere utilizzato per la preparazione di terreni speciali per l'isolamento di microrganismi patogeni difficili da coltivare in terreni comuni, tra cui: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae e Histoplasma capsulatum.
Con l'additivo antibiotico, l'agar BHI diventa un terreno selettivo per l'isolamento dei funghi.
Base
È un terreno di coltura nutriente per isolare microrganismi moderatamente esigenti e il suo arricchimento può essere aumentato con l'aggiunta di sangue e altri integratori alimentari.
È un terreno di coltura non selettivo, quindi consente la crescita della maggior parte dei batteri Gram positivi e Gram negativi, nonché di alcuni funghi. Tuttavia, può essere reso selettivo con l'aggiunta di antibiotici.
Il terreno contiene infusione di cervello e cuore di vitello, idrolizzato peptico di tessuti animali e idrolizzato pancreatico di caseina; Tutti questi composti agiscono come fonti di vitamine, amminoacidi, azoto e carbonio.
Il glucosio è un carboidrato che fornisce energia ai microrganismi una volta che l'hanno fermentato. Nel frattempo, il cloruro di sodio e il fosfato disodico mantengono l'equilibrio osmotico e forniscono un pH vicino alla neutralità. Infine, l'agar conferisce una consistenza mediamente solida.
Preparazione
Pesare 52 grammi del mezzo disidratato e sciogliere in un litro di acqua distillata. Portare la miscela a una fonte di calore fino all'ebollizione, mescolando frequentemente durante il processo di dissoluzione.
Le piastre o i cunei di agar BHI possono essere preparati senza additivi.
Cunei
Per la preparazione degli spicchi servire il preparato fino a riempire la metà di ogni provetta, coprire e sterilizzare in autoclave a 121 ° C per 15 minuti, quando si lasciano adagiare su una base finché non si solidificano. Successivamente conservare in frigorifero fino al momento dell'uso.
Cunei BHI per batterioteca. Fonte: foto scattata dall'autore MSc. Marielsa Gil.
Piatti
La miscela disciolta viene autoclavata a 121 ° C per 15 minuti, lasciata raffreddare a 50 ° C e 20 ml del terreno vengono serviti in piastre Petri sterili. Si lasciano solidificare, si capovolgono e si conservano in frigorifero fino al momento dell'uso. Lasciare che i piatti raggiungano la temperatura ambiente prima di seminare.
Il pH del mezzo deve rimanere a 7,4 ± 0,2.
Il mezzo grezzo è di colore beige e il mezzo preparato è di colore ambra chiaro.
Preparazione dell'agar sangue
Dopo aver sterilizzato il terreno, raffreddare a una temperatura di circa 45-50 ° C, quindi aggiungere il sangue (50 ml), mescolare delicatamente per omogeneizzare e servire in condizioni asettiche 20 ml in ciascuna capsula di Petri. Se si formano delle bolle sul piatto, la fiamma più leggera deve essere passata velocemente sulle bolle per eliminarle.
Allo stesso modo, è possibile preparare terreni speciali aggiungendo gli additivi corrispondenti quando la miscela raggiunge una temperatura compresa tra 45 e 50 ° C.
Il terreno rimane rosso ciliegia.
applicazioni
Utilizzare senza supplementi
L'agar BHI senza additivi è utile come coltura primaria e per la semina di ceppi puri di microrganismi a bassa o media esigenza per l'identificazione successiva.
Essendo un terreno di colore chiaro, è ideale per l'osservazione dei pigmenti e, non contenendo sostanze interferenti, su di esso possono essere eseguiti alcuni test biochimici, come ossidasi e catalasi, oppure si possono montare altri test biochimici da colonie da questo agar.
Allo stesso modo, i cunei di agar BHI sono ampiamente utilizzati per il mantenimento dei ceppi per un certo periodo in laboratorio (batterioteca).
Piastre o cunei seminati dalla superficie con ceppi batterici vengono incubati a 37 ° C per 24-48 ore. Nel frattempo, nei funghi la temperatura e il tempo di incubazione dipenderanno dal tipo di fungo che si sta cercando.
Come base agar per la preparazione di altri terreni
Con questa base si possono preparare terreni arricchiti e selettivi.
arricchito
La sua funzione principale è quella di servire come base per la preparazione di agar sangue per l'uso di routine nei laboratori di microbiologia. In particolare, la base BHI è favorevole all'isolamento di Streptococcus sp. Tuttavia, ha l'inconveniente di non essere adatto per l'osservazione degli schemi di emolisi perché contiene glucosio.
Viene anche utilizzato nella preparazione di agar sangue di coniglio o cavallo per l'isolamento di Haemophilus sp. Per ottenere i migliori risultati, è possibile aggiungere un integratore di arricchimento (IsoVitaleX).
Se i campioni provengono dalle vie respiratorie, la bacitracina può essere aggiunta all'agar per inibire la flora associata e aumentare la probabilità di guarigione dell'Haemophilus sp.
In alternativa, è possibile preparare agar sangue (di agnello o umano) con cistina tellurite per isolare Corynebacterium diphtheriae. Allo stesso modo, è utile preparare agar sangue di coniglio, con l'aggiunta di cistina e glucosio per l'isolamento della Francisella tularensis.
La semina delle piastre di agar sangue avviene per esaurimento e vengono incubate a 35-37 ° C per 24-48 ore in microaerofilia (5-10% CO 2 ).
Selettivo
Questo terreno con l'aggiunta di antibiotici può sostituire l'agar Sabouraud per l'isolamento dei funghi.
La combinazione di agar BHI con cloramfenicolo - gentamicina o penicillina -, streptomicina e sangue di cavallo è ideale per l'isolamento di Histoplasma capsulatum.
A seconda del microrganismo da isolare, si consiglia l'incubazione a 35-37 ° C oa temperatura ambiente in aerobiosi. A volte è necessaria l'incubazione in entrambi gli intervalli di temperatura, utilizzando 2 piastre per questo.
Alcuni funghi come Trichophyton mentagrophytes devono essere incubati a temperatura ambiente per un massimo di 7 giorni.
QA
Da ogni lotto preparato, si consiglia di incubare 1 piastra o cuneo a 37 ° C per 24 ore e verificare che non vi sia crescita; È particolarmente importante quando si prepara l'agar sangue, perché è un terreno facilmente contaminato.
D'altra parte, la qualità del terreno può essere valutata inoculando ceppi standard noti o certificati e osservando il loro sviluppo.
In questo senso, per valutare l'agar BHI senza additivi, possono essere utilizzati ceppi di Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 o Candida albicans ATCC 10231. Vengono incubati a 37 ° C in aerobiosi per 24-48 ore. In tutti i casi, si prevede una crescita soddisfacente.
I ceppi di Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 o Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533 possono essere seminati per valutare piastre di agar sangue.
I ceppi batterici vengono incubati a 37 ° C in microaerofilia per 24 ore, mentre il fungo viene incubato a temperatura ambiente in una camera umida per un massimo di 7 giorni. Si prevede una crescita soddisfacente in tutti i casi.
Riferimenti
- Britannia Laboratories. Brain Heart Infusion Agar. 2015. Disponibile su: britanialab.com.
- BD Laboratories. Agar Brain Heart Infusion (BHI). 2013, disponibile su: bd.com.
- Laboratorios Difco Francisco Soria Melguizo, SA Brain Heart Infusion Agar. 2009.
- Laboratorio Neogen. Brain Heart Infusion Agar. Disponibile su: foodsafety.neogen.com
- Gil M. Blood agar: fondazione, usi e preparazione. 2018 Disponibile su: lifeder.com.
- Collaboratori di Wikipedia. Infusione di cuore e cervello. Wikipedia, l'enciclopedia libera. 19 settembre 2018, 03:58 UTC. Disponibile su: wikipedia.org. Accesso 2 marzo 2019.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 ed. Editoriale Panamericana SA Argentina.