BAIRD PARKER AGAR: FONDAZIONE, PREPARAZIONE E UTILIZZO - BIOLOGIA - 2024

L' agar Baird Parker è una coltura selettiva e differenziale di terreno solido. È stato creato nel 1962 per il rilevamento e il conteggio degli stafilococchi coagulasi positivi (Staphylococcus aureus).

È composto da idrolizzato pancreatico di caseina, estratto di carne, estratto di lievito, cloruro di litio, glicina, piruvato di sodio, tellurito di potassio, agar e emulsione di tuorlo d'uovo.

Colonie tipiche di Staphylococcus aureus su agar Baird Parker. Fonte: Daizy John

Baird Parker Agar si basa sulla capacità di S. aureus di ridurre la tellurite e produrre lecitinasi. Entrambe le proprietà generano una colonia con caratteristiche specifiche per questa specie. Pertanto, è altamente efficace nel rilevare questo microrganismo.

Le colonie tipiche di S. aureus sono nere o grigio scuro, con un bordo incolore e un alone chiaro che le circonda, differenziandole dagli altri microrganismi. Questo patogeno può essere trovato in campioni clinici, acque, cosmetici e cibi crudi o cotti.

La sua diagnosi o rilevazione è della massima importanza, a causa della varietà di patologie che produce, come intossicazione alimentare, sindrome della pelle ustionata, sindrome da shock tossico, ascessi, meningite, setticemia, endocardite, tra gli altri.

Base

Potere nutriente

L'idrolizzato pancreatico di caseina, l'estratto di carne e l'estratto di lievito sono le fonti di nutrienti, vitamine e minerali necessari per lo sviluppo microbico generale, mentre il piruvato e la glicina sono composti che favoriscono la crescita specifica dello Staphylococcus aureus.

Selettivo

Baird Parker Agar è selettivo perché contiene sostanze che inibiscono la crescita della flora di accompagnamento, promuovendo nel contempo lo sviluppo di S. aureus. I composti inibitori sono il cloruro di litio e il tellurito di potassio.

Differenziale

Questo terreno consente di differenziare S. aureus dal resto degli stafilococchi coagulasi negativi. S. aureus ha la capacità di ridurre la tellurite in tellurio nero metallico libero, formando colonie nere o grigio scuro.

Allo stesso modo, il tuorlo d'uovo fornisce i substrati per dimostrare la presenza dell'enzima lecitinasi e lipasi. S. aureus è lecitinasi positivo e quindi si osserverà un alone chiaro intorno alla colonia, indicando che la lecitina è stata idrolizzata.

In questo senso, l'aspetto su questo agar di colonie nere lucide o grigio scuro con un alone chiaro intorno indica la presenza di S. aureus.

Se si forma una zona di precipitazione, è indicativa dell'attività della lipasi. Alcuni ceppi di S. aureus sono lipasi positivi e altri negativi.

Nel caso in cui S. aureus sia lipasi positivo, si osserverà un'area opaca intorno alla colonia nera o grigio scuro, e quindi un alone chiaro dovuto all'azione della lecitinasi.

Le colonie di batteri diversi da S. aureus in grado di crescere su questo terreno svilupperanno colonie incolori o marroni senza alone circostante.

Colonie nere atipiche possono anche essere viste con o senza un bordo incolore, ma senza un alone chiaro. Queste colonie non dovrebbero essere prese in considerazione, non corrispondono a S. aureus.

Preparazione

Emulsione di tuorlo d'uovo

Prendi un uovo di gallina fresco, lavalo bene e mettilo in alcool al 70% per 2 o 3 ore. L'uovo viene quindi aperto in modo asettico e l'albume viene accuratamente separato dal tuorlo. Successivamente si prendono 50 ml di tuorlo e si mescolano con 50 ml di soluzione fisiologica sterile.

Tellurite di potassio 1% p / v

Alcune case commerciali vendono tellurite di potassio all'1% pronto per l'uso. Viene aggiunto al terreno prima che il terreno si solidifichi.

Per preparare questa soluzione in laboratorio, si pesano 1,0 g di tellurite di potassio e si sciolgono in una parte di acqua. Successivamente, la quantità di acqua viene completata fino a raggiungere i 100 ml. La soluzione deve essere sterilizzata con il metodo di filtrazione.

Preparazione del terreno di coltura

Pesare 60 g di terreno disidratato e sciogliere in 940 ml di acqua distillata. Lascia riposare la miscela per circa 5-10 minuti.

Applicare calore mescolando frequentemente il terreno per migliorare il processo di dissoluzione. Porta a ebollizione per un minuto. Sterilizzare in autoclave a 121 ° C per 15 minuti.

Lasciate riposare fino a raggiungere la temperatura di 45 ° C e aggiungete 50 ml di emulsione di tuorlo d'uovo e 10 ml di tellurite all'1%. Mescolare bene e versare 15-20 ml su piastre Petri sterili.

Lasciar solidificare, ordinare capovolto in placche e conservare in frigorifero fino al momento dell'uso.

Il pH finale del terreno preparato deve essere 6,8 ± 0,2.

Prima di seminare un campione, attendere che la piastra raggiunga la temperatura ambiente. Semina i piatti strisciando o seminando in superficie con una spatola Drigalski.

Il colore del terreno disidratato è marrone chiaro e il colore del terreno preparato è ambra chiaro.

Uso

Campioni clinici

I campioni clinici vengono seminati direttamente, scaricando parte del materiale ad un'estremità della piastra, e da lì viene striato dall'esaurimento. Incubare per 24-48 ore a 35-37 ° C.

Campioni di cibo

Pesare 10 gr del campione alimentare e omogeneizzare in 90 ml di acqua peptone allo 0,1%, da lì si preparano le diluizioni se necessario. Inoculare le piastre in triplicato con 0,3 ml delle soluzioni preparate e seminare in superficie con una spatola Drigalski. Incubare per 24-48 ore a 35-37 ° C.

Questa metodologia consente di contare le colonie tipiche ottenute ed è ideale quando si sospetta la presenza di S. aureus superiore a 10 CFU per g / ml di campione.

Se si sospetta che la quantità di S. aureus sia piccola o c'è molta flora associata, si suggerisce di arricchire il campione in brodo di soia tripticasi con 10% di NaCl e 1% di piruvato di sodio. Ciò promuoverà la crescita di S. aureus e inibirà lo sviluppo della flora associata. Le provette torbide vengono seminate su agar Baird Parker.

Campioni d'acqua

In un sistema di filtrazione sotto vuoto sterilizzato vengono filtrati 100 ml di acqua in studio e successivamente la membrana microporosa da 0,4 micron viene rimossa con una pinza sterile e posta su una piastra Baird Parker. Incubare per 24-48 ore a 35-37 ° C. Questa tecnica consente il conteggio delle tipiche colonie di S. aureus.

QA

Per valutare la qualità dell'agar Baird Parker è possibile utilizzare ceppi noti come Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 o Proteus mirabilis ATCC 43071.

Nel caso dei ceppi di S. aureus ATCC, è noto che riduce la tellurite e sono lipasi e lecitinasi positivi. Pertanto, deve esserci uno sviluppo soddisfacente e crescere colonie convesse con un centro nero e un bordo incolore, con un alone opaco e un alone più esterno leggero.

Da parte sua, si prevede che S. epidermidis si sviluppi male su questo terreno, con colonie da grigio-brunastre a nere, senza un alone chiaro.

Per E. coli e P. mirabilis si prevede che sia totalmente o parzialmente inibito. In caso di crescita, si svilupperanno colonie marroni senza un'area opaca o un alone leggero.

raccomandazioni

-Il terreno non deve essere riscaldato dopo aver aggiunto la tellurite e il tuorlo d'uovo.

-La preparazione dell'emulsione di tuorlo d'uovo e la sua aggiunta nel mezzo è un passaggio molto vulnerabile alla contaminazione. È necessario prestare estrema attenzione.

-Se è presente la presenza di colonie tipiche di S. aureus, deve essere confermata eseguendo un test della coagulasi su detto ceppo.

-Se ci sono risultati dubbi con la coagulasi, devono essere montati altri test di conferma.

-Fare attenzione a non confondere la presenza di colonie tipiche di S. aureus con colonie nere atipiche.

Riferimenti

1. Collaboratori di Wikipedia. Agar Baird-Parker. Wikipedia, l'enciclopedia libera. 15 marzo 2017, 19:36 UTC. Disponibile su: wikipedia.org/ Accesso 18 febbraio 2019.
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6. Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Trasporto di Staphylococcus aureus enterotossigeno tipo A, in strisci nasofaringei in manipolatori di alimenti. Rev Med Chile 2017; 145: 1559-1564
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