OLIO DA IMMERSIONE: COMPOSIZIONE, CARATTERISTICHE, USI - BIOLOGIA - 2024

L' olio da immersione è un liquido viscoso trasparente con un indice di rifrazione elevato. Per questo motivo è ampiamente utilizzato nelle osservazioni microscopiche, poiché fornisce la proprietà di concentrare la luce quando passa attraverso l'obiettivo 100X del microscopio, aumentandone il potere risolutivo.

Ciò si verifica perché tra l'obiettivo e lo striscio si forma una pellicola viscosa che impedisce ai raggi luminosi di disperdersi quando raggiungono l'aria, concentrando così i fasci luminosi verso il campione.

Contagocce con immersione in olio e microscopio focalizzato con obiettivo 100X mediante immersione in olio. Fonte: Pixabay.com

L'olio da immersione viene utilizzato solo con l'obiettivo 100X. Ecco perché l'obiettivo 100X è anche chiamato obiettivo di immersione. Gli altri sono noti come bersagli asciutti. Questa lente non può essere utilizzata senza l'olio da immersione, poiché senza di essa la visualizzazione non sarebbe soddisfacente.

La funzione principale dell'olio da immersione è quella di fornire immagini più chiare, nitide e definite, consentendo l'osservazione di dettagli che con altre lenti non sarebbe possibile.

Il primo olio utilizzato a questo scopo è stato l'olio di anice, utilizzato insieme alla prima lente da immersione ideata da Giovanni Battista Amici. Ciò ha solo impedito l'aberrazione cromatica, ma non ha aumentato l'apertura numerica del sistema di lenti.

Quindi è stato utilizzato l'olio di cedro, ma aveva molti svantaggi che ne hanno costretto il disuso. Tra questi c'era la sua elevata acidità, che ha danneggiato gli obiettivi a breve termine.

Successivamente sono state utilizzate altre sostanze come l'acqua e la glicerina fino a creare oli sintetici da immersione, che a poco a poco sono stati raffinati fino a raggiungere l'attuale olio da immersione, che è un composto complesso di sostanze organiche.

Composizione dell'olio da immersione

L'olio da immersione è costituito da una miscela di composti organici quali: terfenile, terfenile idrogenato, idrocarburi naturali e polibuteni.

Caratteristiche dell'olio di immersione

L'olio da immersione è un liquido giallo chiaro, di aspetto leggermente viscoso, con un odore caratteristico e una densità compresa tra 0,92 e 0,99 g / cm ³ .

L'olio da immersione non è solubile in acqua e ha un punto di ebollizione di 340 ° C. L'indice di rifrazione a (n 20 ° C / D): varia da 1.482 - 1.516. Nel frattempo, l'indice di flash è 110 ° C e la viscosità varia da 100 a 120 mPa.s.

Questo prodotto deve essere smaltito correttamente, poiché è ecotossico. In altre parole, è dannoso per l'ambiente, colpendo principalmente gli animali acquatici. D'altra parte, è irritante per la pelle e le mucose. Se ingerito è nefrotossico e cardiotossico.

L'olio da immersione è stabile tra i 15 ei 25 ° C, la temperatura alla quale deve essere conservato.

Nozioni di base sull'olio da immersione

Quando si utilizzano lenti con ingrandimento maggiore, è necessario aumentare l'intensità della luce. Tuttavia, molti dei fasci di luce vengono persi perché vengono dispersi quando raggiungono l'aria (spazio tra il vetrino e la lente) e anche alcuni raggi vengono riflessi totalmente.

L'olio da immersione ha un indice di rifrazione simile al vetro. Pertanto, quando l'olio entra in contatto tra la lente 100X e il vetrino coprioggetto, i fasci di luce si concentrano.

I raggi concentrati attraversano il campione e rendono più nitida l'immagine, ovvero aumentano l'apertura numerica dell'obiettivo e correggono le aberrazioni cromatiche e sferiche.

Usi o applicazioni

L'uso dell'olio da immersione è particolarmente necessario quando è necessario osservare un'immagine in modo più ampio, utilizzando l'obiettivo di ingrandimento più elevato (obiettivo 100X) per vedere dettagli essenziali per stabilire una diagnosi.

Pertanto, è ampiamente utilizzato negli studi microscopici in vari settori come: istologia, citologia, ematologia e batteriologia. Ad esempio, è utile per studiare le caratteristiche delle cellule e dei tessuti di un paziente.

Viene utilizzato anche per l'analisi degli strisci di sangue, dove si vogliono dettagliare le caratteristiche degli emoparassiti all'interno e all'esterno degli eritrociti, nonché nelle preparazioni di Gram, per definire le caratteristiche morfotintoriali dei microrganismi.

Viene generalmente utilizzato nelle preparazioni fisse, in quanto sconsigliato nelle preparazioni fresche. Questo perché la tensione superficiale dell'olio fa muovere il vetrino coprioggetto, provocando lo spostamento del campione durante l'osservazione e impedendo l'analisi.

D'altra parte, l'olio da immersione non è utile solo nella microscopia ottica convenzionale: viene anche utilizzato nei microscopi a fluorescenza a riflessione interna totale (TIRFM) e nelle applicazioni a fluorescenza confocale.

Procedura per osservare una preparazione utilizzando olio per immersione

Per visualizzare un vetrino al microscopio, il vetrino deve prima essere messo a fuoco con l'obiettivo di ingrandimento più basso, solitamente il 10X, con una bassa intensità di luce.

Quindi va all'obiettivo 40X e il percorso della luce è leggermente aumentato. Alcune analisi possono essere eseguite a questo ingrandimento, ma è necessario un ingrandimento 100X per vedere i dettagli strutturali.

Prima di passare all'obiettivo 100X, una goccia di olio da immersione viene posizionata sul vetrino, proprio dove si desidera osservare, quindi la torretta del microscopio viene spostata per individuare l'obiettivo 100x nella preparazione.

L'intensità della luce viene regolata (aumentata) (spostando il condensatore e aprendo il diaframma). Quindi alcuni piccoli movimenti della vite micrometrica (in avanti o indietro) dovrebbero mettere a fuoco perfettamente se il microscopio utilizza obiettivi parafocali.

Se provi a mettere a fuoco la preparazione direttamente con l'obiettivo a immersione, potresti avere problemi a trovare la messa a fuoco. Non è un'azione impossibile, ma la difficoltà aumenta notevolmente.

Cura

Per utilizzare l'olio da immersione, è necessario tenere conto di alcune condizioni.

Quando è stata eseguita una preparazione colorata, come uno striscio macchiato di Giemsa o Gram, attendere che lo striscio si asciughi completamente prima di immergere in olio. Altrimenti l'olio insieme all'acqua formeranno delle micelle che non permetteranno di vedere il preparato.

D'altra parte, dopo aver osservato il lotto di preparazioni, cioè alla fine della giornata lavorativa, l'obiettivo 100X deve essere pulito accuratamente, utilizzando una carta per lenti con etanolo. Se la lente viene lasciata sporca, l'olio si asciugherà su di essa e quindi sarà molto difficile rimuoverla, danneggiando il campo visivo.

Allo stesso modo, si deve tener conto che l'olio è infiammabile e deve essere tenuto lontano da fonti di calore (accendini). È importante evitare di riscaldarlo oltre i 65 ° C.

Infine, l'olio è un prodotto tossico. Pertanto, il contatto diretto con la pelle e le mucose deve essere evitato, dove può causare una leggera irritazione. Per evitare incidenti, si consiglia l'uso di guanti e occhiali di protezione per maneggiarlo.

In caso di contatto con l'olio, l'area deve essere lavata con abbondante acqua. Se l'olio schizza negli occhi, deve essere lavato allo stesso modo, tenendo gli occhi aperti. In caso di ingestione accidentale, è importante ingerire acqua calda e indurre il vomito, oltre ad andare dal medico più vicino.

Riferimenti

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