TEST DELLA COAGULASI: LOGICA, PROCEDURA E USI - BIOLOGIA - 2025

Il test della coagulasi è una tecnica di laboratorio utilizzata per rivelare la presenza dell'enzima coagulasi. Questo enzima ha la proprietà di coagulare il plasma. Loeb nel 1903 fu il primo a descrivere questo enzima.

Questo test viene eseguito su cocchi Gram-positivi, catalasi-positivi, permettendo di distinguere i ceppi di Staphylococcus aureus dal resto degli stafilococchi, essendo l'unico microrganismo di rilevanza clinica che lo produce.

Entrambe le immagini rivelano un test della coagulasi positivo. Fonte: immagine a sinistra: Philippinjl. Immagine a destra: foto scattata dall'autore MSc. Marielsa Gil.

In questo senso, i membri della famiglia delle Staphylococaceae che risultano negativi al test sono spesso indicati come Staphylococcus coagulasi negativo.

Esistono altri ceppi oltre a S. aureus che possono produrre coagulasi, come Staphylococcus schleiferi spp coagulans, S. hyicus, S. intermedius e S. delphini.

Tuttavia, i primi tre sono di importanza clinica a livello veterinario e molto raramente potrebbero essere trovati come agente causale di infezioni nell'uomo, mentre S. delphini si trova solo in ambienti marini.

Inoltre, sono facilmente differenziabili perché S. hyicus e S. intermedius non fermentano il mannitolo e S. schleiferi spp coagulans non fermenta maltosio o trealosio, mentre S. aureus fermenta questi carboidrati.

La presenza dell'enzima coagulasi è stata collegata alla virulenza dei ceppi. Tuttavia, questa teoria è andata in pezzi, poiché si osservano altre specie virulente coagulasi negative in grado di produrre infezioni significative.

Base

Interpretazione

Agglutinazione entro 5-20 secondi (test fortemente positivo).

Agglutinazione variabile che si verifica tra 20 secondi e un minuto (test positivo ritardato).

Un certo grado di agglutinazione dopo un minuto (evidenza dubbia). Si consiglia di ripetere il test o di confermare con il metodo in provetta.

Non c'è agglutinazione (test negativo).

Risultato con SSF. Deve sempre dare negativo, se dà positivo automaticamente il risultato del test viene invalidato.

-Test della coagulasi in provetta

materiali

-Provetta sterile

-Plasma

-Bagno di Maria a 37 ° C.

Tecnica

Pipettare 0,5 ml di plasma in una provetta 12 x 75 con una pipetta sterile. Caricare l'ansa in platino con 2-4 colonie pure per studiare da una coltura solida per 18-24 ore e scioglierle nel plasma mescolare accuratamente e incubare a 37 ° C per 4 ore.

Esamina il tubo nella prima ora senza scuoterlo, inclinalo delicatamente. Se non si vede ancora un coagulo, è possibile continuare a osservarlo ogni 30 minuti fino al completamento delle 4 ore. Se dopo 4 ore è ancora negativo, si può lasciare fino a 24 ore ma a temperatura ambiente. Osserva e riporta il risultato.

Sulla base dell'esperienza, alcuni microbiologi raccomandano di utilizzare 500 µl di una sospensione batterica da una coltura di 18 ore in mezzo liquido per eseguire il test.

Sembra offrire risultati più rapidi e affidabili rispetto all'emulsione di colonie da terreni solidi, soprattutto se è stato utilizzato plasma umano ottenuto dalla banca del sangue.

L'uso di ceppi da brodo aiuta a diluire l'eventuale presenza di anticorpi umani anti-stafilococco nel plasma che possono inibire l'azione della coagulasi.

Interpretazione

Se si osserva un coagulo che comprende tutto il fluido (coagulazione completa) o un coagulo senza nulla nel liquido rimanente (coagulazione parziale), deve essere considerato un test positivo.

Se non si forma alcun coagulo, cioè la sospensione rimane omogenea, il test è negativo.

-Test della coagulasi con fibrinogeno

Il fibrinogeno viene utilizzato allo stesso modo del plasma e viene utilizzato sia per i test su vetrino che per i test in provetta. Procedere come descritto per il plasma e interpretare allo stesso modo.

Uso

Viene utilizzato per differenziare lo Staphylococcus aureus dagli stafilococchi coagulasi negativi.

QA

Tenere a disposizione colture fresche di un ceppo di S. aureus da utilizzare come controllo positivo. Come controllo negativo è disponibile anche un ceppo di S. epidermidis.

limitazioni

-Un test positivo non deve essere lasciato in incubazione per 24 ore, poiché S. aureus produce una fibrinolisina che scioglie il coagulo.

-Per un test affidabile, deve essere utilizzato plasma fresco o ricostituito di recente, così come è importante utilizzare colture batteriche fresche (da 18 a 24 h). Ciò evita falsi negativi.

-Il test deve essere eseguito insieme a un controllo negativo e uno positivo.

-Alcuni terreni solidi possono interferire con il test della coagulasi. Si sconsiglia di utilizzare colonie di agar salato al mannitolo.

-Se si utilizza plasma citrato, si consiglia di inserire 5 unità di eparina per ml di plasma per evitare falsi positivi. Questo perché alcuni microrganismi diversi da S. aureus possono abbattere il citrato e causare la coagulazione del plasma. In questo caso, è consigliabile fare un test di Gram e catalasi.

-È importante, nel test in provetta, monitorare la reazione ogni 30 minuti, poiché vi sono ceppi di S. aureus che producono alte concentrazioni di fibrinolisina e diluiranno rapidamente il coagulo appena formato. Evita i falsi negativi.

-Quando si monitora il test, evitare di scuotere bruscamente il tubo, questo può distruggere l'inizio della formazione di coaguli che non sarà ripristinata in seguito, causando falsi negativi.

Riferimenti

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosi microbiologica. 5a ed. Editoriale Panamericana SA Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 ed. Editoriale Panamericana SA Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Test biochimici per l'identificazione di batteri di importanza clinica. 3a ed. Editoriale Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
4. Laboratori Pro-Lab. Il coniglio coagula il plasma. Disponibile su: prolab.com
5. "Coagulasi." Wikipedia, l'enciclopedia libera. 12 febbraio 2019, 04:23 UTC. 22 aprile 2019, 15:50 wikipedia.org.