SAFRANINA: CARATTERISTICHE, USO, TECNICHE, TOSSICITÀ - CHIMICA - 2025

La safranina è un colorante meriquinoide, chiamato per la sua struttura chimica avente due anelli benzenoidi e 2 anelli chinoidi, questi ultimi sono quelli che forniscono il colore rosso.

È anche chiamato dimetil safranina o rosso basico 2 nella sua forma abbreviata, poiché il suo nome scientifico è 3,7-diamino-2,8-dimetil-5-fenil-fenaziniocloro dimetil safranina e la formula chimica è C ₂₀ H ₁₉ N ₄ Cl.

Struttura chimica della safranina che indica anelli benzenoidi e chinoidi / Soluzione acquosa di safranina. Fonte: NEUROtiker a cura di MSc. Marielsa Gil / LHcheM

Esiste una variante chiamata trimetil-safranina ma non c'è una differenza significativa tra le due sostanze.

La safranina è un colorante monocromatico e, a seconda delle caratteristiche della formula chimica, è una sostanza caricata positivamente. Pertanto, ha un'affinità per le strutture caricate negativamente. Queste strutture saranno colorate di rosso.

Questa proprietà gli conferisce l'applicabilità in molte tecniche istologiche per colorare varie strutture cellulari, sia di organismi eucarioti che procarioti.

La safranina è utilizzata come colorante di contrasto in tecniche importanti e ben note per l'uso di routine in batteriologia. Queste tecniche sono: la colorazione di Gram-Hucker, la colorazione di Schaeffer Fulton per le spore o la colorazione di capsule batteriche, tra le altre.

caratteristiche

Il colore dello zafferano (una spezia ottenuta dagli stimmi del fiore di Crocus sativus) è stata l'ispirazione per nominare questo colorante. Dal termine zafferano deriva il nome di safranina. Ciò è dovuto alla grande somiglianza tra il colore dello zafferano e la colorazione fornita da questo colorante.

La safranina è disponibile come cristalli o polvere, entrambe le presentazioni sono solubili in acqua. Il colorante safranina è inodore. Macchie strutture rosse. Le strutture che attraggono il colorante safranina sono chiamate safranofili.

Strutturalmente la safranina è complessa, ha due anelli benzenoidi alle estremità e al centro si trovano i due anelli chinoidi dove si trova il catione N ⁺ . Il centro della struttura è il sistema incaricato di fornire il colore. A causa di questa caratteristica, questo colorante è classificato nella categoria II.

Uso

La safranina viene utilizzata per colorare varie strutture. Evidenzia soprattutto le cellule di Kulchitsky presenti nel tratto gastrointestinale, chiamate anche cellule enterocromaffine.

È in grado di colorare microrganismi appartenenti alla famiglia delle Rickettsiaceae. Allo stesso modo, è utilizzato in varie tecniche, come il metodo Koster, un modificato utilizzato per macchiare i batteri del genere Brucella.

D'altra parte, la safranina viene utilizzata nella tecnica di colorazione delle spore di Schaeffer Fulton e nella colorazione di Gram-Hucker. In entrambe le tecniche, la safranina funziona come colorante di contrasto.

Nella prima le spore assumono il colore del verde malachite e il resto delle strutture è rosso della safranina. Nel secondo, i batteri Gram negativi perdono il colore del cristallo viola nella fase di decolorazione, quindi la safranina è quella che colora di rosso i batteri Gram negativi.

Inoltre, la safranina viene utilizzata in batteriologia per preparare terreni agar Brucella con una diluizione di safranina 1: 5000. Questo terreno serve a differenziare la specie Brucella suis dal resto della specie. Su questo terreno crescono Brucella melitensis e Brucella abortus, ma B. suis è inibito.

In campo agroalimentare, la safranina è stata utilizzata al 2,25% e diluita 1:10 per colorare i campioni di steli della pianta di canna da zucchero.

Questa pianta è comunemente colpita dal batterio Leifsonia xyli subsp. xyli, che danneggia lo xilema della pianta. Gli steli colorati vengono valutati per determinare la funzione dei vasi xilematici.

Tecniche nel campo della batteriologia

Colorante Castañeda per la colorazione r

Uno striscio di sangue o tessuto viene posto in una soluzione tampone (tampone fosfato pH 7,6). Lasciar asciugare spontaneamente e poi coprire con blu di metilene per 3 minuti e controcolorare con safranina. Le Rickettsiae sono di colore blu, in contrasto con lo sfondo rosso.

Colorazione Koster modificata per

Viene fatta una macchia e fiammata nell'accendino per il fissaggio. Successivamente, viene ricoperta con una miscela di 2 parti di safranina acquosa satura con 3 parti di soluzione KOH 1 mol / L, per 1 minuto. Si esegue un lavaggio con acqua distillata e controcolorato con blu di metilene fenico all'1%.

Se il campione contiene batteri del genere Brucella, appariranno in arancione su sfondo blu.

Colorazione della capsula batterica

Si prepara una miscela di sospensione batterica con inchiostro di china e si aggiunge safranina. Al microscopio apparirà un alone rossastro attorno a ciascuna capsula batterica con uno sfondo nero.

Colorazione di spore

Si prepara una diffusione con la sospensione batterica. Quindi viene fissato al calore. Viene ricoperto con il 5% di verde malachite, fiammeggia frequentemente fino all'emissione di vapori. Il processo viene ripetuto per 6-10 minuti. Infine viene lavato con acqua e controcolorato con lo 0,5% di safranina per 30 secondi. I bacilli si colorano di rosso e le spore di verde.

Colorazione di Gram-Hucker

Si fa uno striscio con sospensione batterica e si fissa al calore. Copri il vetrino con crystal violet per 1 minuto. Quindi lugol viene posto come soluzione mordente per 1 minuto. Successivamente viene sbiancato con alcool acetonico ed infine controcolorato con safranina per 30 secondi.

I batteri Gram positivi si colorano di viola bluastro e i batteri Gram negativi di rosso.

Alcuni laboratori hanno smesso di utilizzare la tecnica Gram-Hucker per adottare la tecnica Gram-Kopeloff modificata. In quest'ultimo, la safranina è sostituita dalla fucsina di base. Questo perché la safranina colora debolmente le specie dei generi Legionella, Campylobacter e Brucella.

Tecniche nel campo dell'istologia

Colorazione delle cellule di Kulchitsky (enterocromaffine)

Le sezioni di tessuto del tratto gastrointestinale sono colorate con cloruro d'argento. Viene quindi decolorato con tiosolfato di sodio e infine controcolorato con safranina.

Le cellule di Kulchitsky si distinguono per la presenza di granuli bruno-nerastri.

Colorazione per osteoartrite

Poiché la safranina ha una carica positiva, si lega molto bene ai gruppi carbossilici e solfato dei glicosaminoglicani. Questi fanno parte dei proteoglicani che compongono la cartilagine articolare. In questo senso, quando si macchia con safranina O, è possibile identificare se c'è o meno una perdita di cartilagine.

La perdita di tessuto cartilagineo può essere misurata utilizzando la scala Mankin o anche chiamata scala dell'osteoartrosi.

La tecnica è spiegata di seguito: la sezione istologica viene immersa in un vassoio con la soluzione di ematossilina di ferro di Weigert, quindi fatta passare attraverso alcool acido e lavata con acqua.

Si prosegue il processo di colorazione immergendo la lastra in fast green, si lava con acido acetico e ora si immerge in safranina O. Per terminare il processo si disidrata utilizzando alcoli a diverse concentrazioni in ordine crescente. L'ultimo passaggio richiede xilene o xilene per la chiarificazione del campione.

I vetrini vengono condizionati con balsamo del Canada o simile per essere osservati al microscopio.

Con questa tecnica i nuclei si colorano di nero, l'osso verde e la cartilagine dove si trovano i proteoglicani rossi.

Colorante per l'identificazione delle macroalghe

Pérez et al nel 2003 hanno proposto una tecnica semplice ed economica per tingere le macroalghe. I campioni vengono preparati in sezioni istologiche di paraffina. Le sezioni sono fissate con l'1% di glicerina, permettendo loro di asciugarsi completamente. Viene quindi posto in xilolo per rimuovere la paraffina.

La sezione viene reidratata facendola passare attraverso una serie di vassoi contenenti etanolo a diversi gradi di concentrazione (ordine decrescente), per 2 min ciascuno.

Successivamente si colora per 5 minuti con una miscela 3: 1 di safranina 1% con blu di toluidina 1%, entrambe preparate con etanolo al 50%. Alla miscela vengono aggiunte tre gocce di acido picrico, che funge da mordente.

Quindi viene disidratato passando nuovamente attraverso i vassoi alcolici, ma questa volta in modo ascendente. Infine si risciacqua con xilolo e si prepara il campione con balsamo del Canada da osservare.

Tossicità

Fortunatamente la safranina è una tintura che non rappresenta un pericolo per chi la maneggia. È un colorante innocuo, non è cancerogeno e non è infiammabile.

Il contatto diretto con la pelle o le mucose può causare un leggero rossore nella zona, senza complicazioni importanti. Per questo, si consiglia di lavare l'area interessata con abbondante acqua.

Riferimenti

1. García H. Colorante safranina O. Tecnico in salute, 2012; 1 (2): 83-85. Disponibile su: medigraphic.com
2. Colorazione Gil M. Gram: fondotinta, materiali, tecnica e usi. Disponibile su: lifeder.com
3. Colorazione di Gil M. Spore: razionale, tecniche e usi. Disponibile su: lifeder.com
4. Safranina. " Wikipedia, l'enciclopedia libera. 7 marzo 2017, 10:39 UTC. 3 agosto 2019, 20:49 en.wikipedia.org
5. Pérez-Cortéz S, Vera B, Sánchez C. Tecnica di colorazione utile nell'interpretazione anatomica di Gracilariopsis tenuifrons e Gracilaria chilensis (Rhodophyta). Act Bot. Venez. 2003; 26 (2): 237-244. Disponibile su: scielo.org.
6. Chiesa di Aleika, Peralta Esther Lilia, Alvarez Elba, Milián J, Matos Madyu. Relazione tra la funzionalità dei vasi xilematici e la presenza di Leifsonia xyli subsp. xyli. Rev. Veg Protection. 2007; 22 (1): 65-65. Disponibile su: scielo.sld