ORCEIN: FONDAZIONE E PREPARAZIONE - CHIMICA - 2026

L' orceína è un viola di colore naturale, estratto da vari licheni come orchilla o archill, principalmente licheni fruticosi Rocella tinctoria e Lecanora parella. La Rocella tinctoria si trova nel continente africano e americano, sebbene possa essere sostituita da altre specie situate in Europa.

Questa macchia è stata ampiamente utilizzata negli studi citogenetici sin dai tempi antichi. In questo senso, la preparazione dell'orceina che include l'acido acetico è stata introdotta da LaCourt nel 1941, motivo per cui inizialmente era chiamata tecnica LaCourt.

Struttura chimica di orceina e soluzione di orceina. Fonte: Wikipedia.org/ Oguenther su de.wikipedia (Dr. Guenther)

Allo stesso modo, per la sua semplicità e il basso costo, è stato utilizzato per la produzione di tornasole (un colorante estratto dai licheni) e in studi istologici (colorazione di cellule e tessuti).

Vari studi hanno utilizzato questa colorazione in combinazione con altre sostanze chimiche, come l'ammoniaca picrocarminato e l'acido acetico, per macchiare rispettivamente le fibre elastiche ei cromosomi. Attualmente l'orceina continua ad essere utilizzata negli studi citogenetici su animali e piante.

Recentemente, Silva et al. Il 2017 ha utilizzato con successo questa macchia per osservare i vari cambiamenti che si verificano nelle fibre elastiche della pelle del pollice negli anziani cileni. Questo studio ha rivelato come le fibre del pollice si alterano con l'invecchiamento.

In questo senso, le fibre elastiche sono state osservate di colore bruno-nero in individui di età superiore agli 80 anni; mentre nei più giovani (dai 60 anni) sono visti come bruno-rossastro. Il citoplasma e altre strutture cellulari diventano verde-giallastro.

Ciò ha permesso di corroborare la presenza e lo stato delle fibre elastiche, in termini di disposizione, quantità e integrità. D'altra parte, è stato anche indicato che l'orceina è di grande aiuto per identificare gli aneurismi e diagnosticare l'arterite, tra le altre condizioni.

Base

L'orceina fa parte del gruppo dei coloranti ossazina e la colorazione si basa sulla sua affinità per il DNA. Il colorante si lega alla carica negativa di questa molecola, rappresentata dal gruppo fosfato. Ecco perché i cromosomi sono colorati di viola.

Tuttavia, il resto delle strutture della cellula assume un colore diverso. Nello specifico, nel caso delle fibre elastiche, queste sono di colore bruno-rossastro, nuclei cellulari dal blu al viola scuro, mentre il collagene non si macchia.

Per questo motivo, l'orceina viene utilizzata per colorare la cromatina e differenziare il sesso in alcune specie di mosche. Allo stesso modo, i nuclei e alcune inclusioni epatiche prodotte dagli antigeni dell'epatite B possono essere colorati.

Le soluzioni di orceina hanno funzioni specifiche nella colorazione. L'orceina A ha la funzione di ammorbidire le membrane cellulari, provocandone la morte e paralizzando il processo della loro divisione. Nel frattempo, l'orceina B è responsabile del completamento della colorazione grazie alla sua adesione ai cromosomi.

Preparazione

Aceto-orceina soluzione 1%

Per preparare una soluzione all'1% di aceto-orceina, 2 grammi di orceina vengono sciolti in 45 ml di acido acetico glaciale, preferibilmente caldo, e vengono aggiunti 55 ml di acqua distillata a temperatura ambiente.

Quindi, viene costantemente miscelato per omogeneizzare la soluzione, per poi lasciarla riposare fino a quando non si raffredda. Infine, viene conservato a 4ºC in barattoli scuri. Questa preparazione è stata utilizzata da Flores 2012, per osservare le fasi di maturazione degli ovociti di vacca.

In questo caso, ad esempio, la soluzione di aceto-orceina viene posta sul tessuto precedentemente fissato in acido acetico-etanolo per 24 ore. Questo processo di colorazione viene eseguito per 30 minuti e il tessuto viene successivamente scolorito.

Allo stesso modo, può essere utilizzato per l'identificazione di organelli nei tessuti multicellulari. In questo caso, uno striscio della mucosa buccale viene colorato con una goccia della soluzione di aceto-orceina, il vetrino viene posizionato sul vetrino e il nucleo della cellula con le sue sottostrutture può essere immediatamente osservato.

Soluzione latto-proponica orceina 1%

Inoltre, l'orceina può essere preparata con altri prodotti chimici come l'acido lattico e l'acido propionico. Per fare ciò, un grammo di orceina viene sciolto in una soluzione premiscelata a temperatura ambiente di 23 ml di acido lattico e 23 ml di acido propionico; componendo il volume con acqua distillata fino a 100 ml.

Con questa soluzione latto-propionica di orceina è possibile osservare le diverse fasi di divisione meiotica delle cellule vegetali. In questo caso, il campione prefissato e idrolizzato viene posto per 15 minuti nella soluzione di orceina latto-propionica e poi il tessuto viene steso su vetrini da microscopio.

Nello studio Duque del 2016 sui cromosomi poligenici, ha utilizzato una preparazione di 2 grammi di orceina diluita in acido acetico e acido lattico all'85%, diluendo con una soluzione di acido acetico al 65%. Infine, ha esaminato i cromosomi nelle ghiandole salivari di Drosophila melanogaster.

Orcein A e Orcein B

È importante notare che, a seconda del campione e di ciò che deve essere valutato, viene preparata la soluzione di orceina appropriata. Così, ad esempio, l'acido cloridrico 1N viene aggiunto alla soluzione di orceina A per osservare la divisione delle cellule.

Mentre la soluzione di orceina B viene sciolta in acido acetico al 45%. Questa tecnica è un metodo di colorazione abbreviato ed è generalmente utilizzata in aggiunta alla colorazione delle strutture cromosomiche.

Pensieri finali

Da secoli, licheni come Lecanora, Parmelia e Umbilicaria possono essere trovati in paesi del continente americano come l'Argentina, che sono grandi fonti di orceina. Anche aree europee come le Isole Canarie erano all'epoca grandi produttori dell'orchilla.

Questo è stato esportato in altre città di questo stesso continente come Genova e paesi come l'Inghilterra, mentre l'Olanda monopolizzava la produzione della cartina di tornasole dell'orchilla. Pertanto, questo lichene è stato successivamente ridotto fino a quando non stava per estinguersi.

Ciò ha portato l'orchilla a essere sostituita da altre piante con proprietà coloranti. Tuttavia, l'emergere di coloranti sintetici ha contribuito alla cessazione del commercio di questo lichene di origine orceina.

Ciò fu possibile grazie a Cocq, che nel 1812 descrisse la sintesi dell'orceina, sapendo allora che è sintetizzata da un composto fenolico chiamato orcinolo. Tuttavia, nonostante ciò, l'orceina naturale è ancora oggi quella preferita.

Ciò può essere dovuto al fatto che l'orcinolo è un composto dall'odore molto forte e la cui esposizione prolungata potrebbe portare a rischi per la salute, come la perdita della capacità di rilevare gli odori. Questi danni all'ipofisi potrebbero passare da temporanei a permanenti quanto maggiore è l'esposizione.

Riferimenti

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