ACQUA PEPTONE: LOGICA, PREPARAZIONE E USI - BIOLOGIA - 2024

L' acqua peptone è un mezzo di arricchimento liquido, non selettivo, utilizzato principalmente come campioni alimentari diluenti o altri materiali. Questo mezzo dal punto di vista chimico è molto semplice, contiene peptone di carne, cloruro di sodio e acqua.

Ha un certo valore nutritivo, permettendo di arricchire il campione. Se sono presenti batteri abusati, questo terreno ha il potere di riparare la vitalità. È particolarmente utile nel recupero dei batteri appartenenti alla famiglia delle Enterobacteriaceae.

Acqua peptone in bottiglia. Fonte: MSc. Marielsa gil

Nel caso del recupero delle Salmonelle, si consiglia l'utilizzo della variante con acqua di peptone sbattuto; Questo serve come mezzo di pre-arricchimento per il campione, in questo caso contiene altri elementi come fosfato disodico e fosfato dipotassico.

Normalmente l'acqua peptonica viene preparata a pH neutro, tuttavia esistono altre varianti in cui è necessario che il pH sia 8,5 ± 0,2 (alcalino), perché i batteri da isolare sono alcalifili, come il Vibrio cholerae.

Inoltre, questo terreno può essere utilizzato come terreno di base per i test di fermentazione dei carboidrati.

Base

I peptoni forniscono i nutrienti necessari per la crescita batterica, in particolare azoto e aminoacidi a catena corta, mentre il cloruro di sodio mantiene l'equilibrio osmotico.

Inoltre, il terreno consente di disperdere, omogeneizzare e riparare le cellule batteriche danneggiate dai processi industriali.

Come diluente è ideale, in grado di sostituire efficacemente la soluzione fisiologica (SSF) o la soluzione tampone fosfato (PBS).

La crescita batterica è evidente osservando la sua torbidità.

Preparazione

Preparazione casalinga (non commerciale)

Pesare 1 g di peptone e 8,5 g di cloruro di sodio, sciogliere in 1 litro di acqua distillata. Il pH dovrebbe essere regolato a 7,0. Per questo, è possibile utilizzare cloruro di sodio 1N.

Preparazione utilizzando mezzo commerciale

Pesare 15 g del terreno disidratato e sciogliere in un litro di acqua distillata. Omogeneizzare la miscela. Se necessario si fa bollire la miscela per 1 minuto per favorire la totale dissoluzione. Servire in flaconi da 100 ml o tubi da 10 ml secondo necessità. Autoclave a 121 ° C per 15 minuti.

Raffreddare e utilizzare o conservare in frigorifero. Il pH finale del mezzo è 7,2 ± 0,2.

Il colore del terreno disidratato è beige chiaro e il terreno preparato è ambra chiaro.

Preparazione per prove di fermentazione

Alla precedente preparazione -prima della sterilizzazione- va aggiunto il carboidrato ad una concentrazione finale dell'1%, più l'indicatore Andrade (fucsina acida) o rosso fenolo (0,018 g / L). I tubi devono essere dotati di una campana Durham per osservare la formazione di gas.

Altre varianti di acqua peptone

Acqua peptone tamponata o tamponata

Contiene idrolizzato enzimatico di caseina, sodio cloruro, fosfato diidrogeno potassio e sodio idrogeno fosfato dodecaidrato. Il pH finale è 7,0 ± 0,2.

Per la sua preparazione, pesare 20 g di terreno disidratato e sciogliere in 1 litro di acqua distillata. Lascia riposare per circa 5 minuti. Riscaldare per 1 minuto fino a completa dissoluzione.

Versare in barattoli adatti secondo necessità. Sterilizzare utilizzando l'autoclave a 121 ° C per 15 minuti.

-Acqua peptone alcalina

Pesare 25 g di terreno disidratato e sciogliere in 1 litro d'acqua. Procedi come descritto sopra. Il pH varia da 8,3 a 8,7.

Uso

L'inoculo viene effettuato posizionando direttamente il campione.

Viene utilizzato per diluire i campioni, soprattutto quando si sospetta che possano essere presenti batteri danneggiati. Di solito le diluizioni sono 1:10 e 1: 100.

Incubare per 24 ore in aerobiosi a 35-37 ° C.

Campioni di feci

Per i campioni di feci per la Salmonella, si raccomanda l'uso di acqua tamponata o tamponata come mezzo di pre-arricchimento.

Per fare ciò, procedere come segue:

Se si formano le feci, prelevare 1 g di campione. Se sono liquidi, prendi 1 ml di feci e sospendi in una provetta con 10 ml di acqua peptonata sbattuta. In caso di tamponi rettali, scaricare il materiale contenuto nel tampone nella provetta con acqua peptone tamponata.

In tutti i casi, mescolare e omogeneizzare molto bene il campione.

Incubare a 37 ° C per 18-24 ore. Successivamente subcoltura in un brodo di arricchimento come il brodo di cistina di selenite o brodo tetrationato a 37 ° C per altre 18-24 ore. Infine, coltivare in terreni selettivi per Salmonella, come SS agar, XLD agar, Hektoen agar, tra gli altri.

Campioni di cibo

L'acqua peptone viene utilizzata come mezzo di arricchimento o come semplice diluente, ma se si cercano specie di Salmonella, viene utilizzata come mezzo di pre-arricchimento, come già descritto.

Nel cibo procedere come segue:

Per i cibi solidi pesare 25 g del campione e per i liquidi misurarne 25 ml. Porre detta porzione in beute contenenti 225 ml di acqua peptone. Mescolare e omogeneizzare il campione.

Se si sospetta che la carica microbica sia elevata, è possibile eseguire diluizioni seriali o decimali per facilitare il conteggio delle unità formanti colonie (CFU).

Il numero di diluizioni dipenderà dal tipo di campione e dall'esperienza dell'analista.

Se, al contrario, si sospetta che la carica microbica sia molto bassa, non è necessario effettuare diluizioni. Successivamente, subcultura su terreni selettivi.

Nel caso di cibo di mare, come molluschi, pesce, tra gli altri, alla ricerca di Vibrio cholerae o altre specie di Vibrio, deve essere utilizzata acqua peptone regolata a pH 8,5 (acqua peptone alcalina).

QA

Da ogni lotto preparato, una o due provette devono essere incubate senza inoculo per 24 ore in aerobiosi a 37 ° C. Alla fine del tempo non si dovrebbero osservare torbidità o cambiamenti di colore.

I ceppi di controllo noti possono essere utilizzati anche per valutare la loro efficacia:

Per questo, possono essere utilizzati i seguenti ceppi batterici: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

In tutti i casi è atteso uno sviluppo microbico soddisfacente, osservato dalla torbidità del terreno.

limitazioni

-Il terreno disidratato è molto igroscopico, quindi deve essere tenuto lontano dall'umidità.

-Il mezzo non deve essere utilizzato se si osserva qualsiasi tipo di deterioramento.

-Il terreno di coltura disidratato deve essere conservato a una temperatura compresa tra 10 e 35 ° C

-Il terreno preparato deve essere conservato in frigorifero (2-8 ° C).

Riferimenti

1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B e Velázquez O. Tecniche per l'analisi microbiologica degli alimenti. 2009, 2a ed. Facoltà di Chimica, UNAM. Messico. Versione per Manuals and Documents Administrator (AMyD) della Faculty of Chemistry, UNAM 1. Disponibile su: http://depa.fquim.unam.mx
2. Britannia Laboratories. Acqua peptonata tamponata. 2015 Disponibile su: britanialab.com
3. Neogen Laboratories. Acqua peptone. Disponibile su: foodsafety.neogen.com
4. Britannia Laboratories. Acqua peptone. 2015 Disponibile su: britanialab.com
5. Merck Laboratories. Acqua peptonata tamponata. Disponibile su: merckmillipore.com
6. Laboratori Conda Pronadisa. Acqua peptone alcalina. Disponibile su: condalab.com
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 ed. Editoriale Panamericana SA Argentina.